芽孢表面展示海藻糖合酶重组枯草芽孢杆菌的构建及应用
发布时间：2020-12-03 21:05
表面展示是将异源多肽和蛋白质固定在噬菌体、细胞或芽孢表面的一种分子生物学技术,而目前已经完成了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的全基因组测序,并且它具有食品安全性,其产生的芽孢也具有极高的安全性,更方便于构建芽孢表面展示系统。海藻糖具有在极端环境下保护生物大分子生命体特征的生物学功能,目前,已实现海藻糖规模化生产的方法为酶法,包括双酶法和单酶法。单酶法是在海藻糖合酶（TreS）作用下,直接将麦芽糖异构为海藻糖的方法。该方法过程简单,易于操作,引起了各国科学家的重视。针对上述内容,本文开展了以下研究工作:（1）选取了11种芽孢衣壳蛋白分别将EGFP展示在B.subtilis WB800n芽孢表面。通过Western Blot及免疫荧光分析,证明已成功将EGFP分别展示在11株重组菌的重组芽孢表面,并得到了不同衣壳蛋白所展示EGFP荧光强度大小的关系为:CotX>CotY>CotF>CotC>CotE>CotG>CotV>CotB>CotM>CotA>CotW。（2）根据测得的不同芽孢衣壳蛋白所展示绿色荧光强度的大小...
【文章来源】：齐鲁工业大学山东省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
芽孢衣壳蛋白表面展示示意图
已经进行了许多研究从而了解芽孢形成的形成是通过明确定义的一系列形态阶段来进行，这和电子显微镜来进行观察。在这个过程中涉及了数上分别由4个DNA 结合蛋白和5个RNA 聚合酶σ因需要合成关键的转录调节蛋白 Spo0A 并通过磷酸化过一种或两种酶就能够发生，而是通过磷酸化的复杂质 Spo0F 的磷酸化是通过至少 5 种不同的自动激酶在递送至 Spo0A 之前转移至 Spo0B。Spo0F~P 和 Sp化本身必须先被一种尚不明确的信号所激活，这些外部环境例如细胞密度、营养饥饿和细胞周期等结 在早期母细胞发育中芽孢的形成起关键作用[12]。一旦孢形成过程。Spo0A~P 可以直接激活或抑制超过 12400 种基因，所有这些都是芽孢形成特异性和/或稳定，芽孢形成的另一个关键正调节因子，σH是过渡阶段）和芽孢形成进入所必需的。
芽孢杆菌的芽孢形态的芽孢从母细胞释放后，通常具有球形或椭圆形，平均直径为 1微镜下，枯草芽孢杆菌芽孢显示出三种主要结构：核心，芽孢皮衣壳围绕皮层组装，在芽孢对有机溶剂和溶菌酶的抗性中起着重中，涂层表现为一系列的同心层，分为两个主要层：厚的高电子的电子密度较小的内涂层。在电子显微镜下，内涂层显示出细小轻微斑点。它由多层组成（2 层~5 层之间，通常约 4 层），宽约包围，宽度约 70~200 nm，斑点比内层颜色更深，外观更加粗糙两个主要的涂层外，在电子显微镜照片上可以看到内层和皮层之这可能是芽孢衣的一部分，并被认为是内涂层。芽孢衣壳组分主芽孢干重约 10%，占总芽孢蛋白质的 25%[14]。最近，通过钌红染周围的另一种结构--糖蛋白层（图 1.3A）。这种结构与芽孢外壳的，可能代表芽孢表面的初始外芽孢[15]。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cloning, Expression and Identification of a New Trehalose Synthase Gene from Thermobifida fusca Genome[J]. Yu-Tuo WEI, Qi-Xia ZHU1, Zhao-Fei LUO1, Fu-Shen LU1, Fa-Zhong CHEN1, Qing-Yan WANG1, Kun HUANG,Jian-Zhong MENG, Rong WANG, and Ri-Bo HUANG*Guangxi Key Laboratory of Subtropical Bioresource Conservation and Utilization, Guangxi University, Nanning 530004, China; 1Sinozyme Biotech Co. Ltd., Nanning 530004, China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2004(07)
[2]一种对斑点和条带信号进行半定量图像分析的简便方法[J]. 张成岗,袁守军,邓美玉,李林,汤仲明,贺福初. 中国体视学与图像分析. 2001(03)
本文编号：2896544
【文章来源】：齐鲁工业大学山东省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
芽孢衣壳蛋白表面展示示意图
已经进行了许多研究从而了解芽孢形成的形成是通过明确定义的一系列形态阶段来进行，这和电子显微镜来进行观察。在这个过程中涉及了数上分别由4个DNA 结合蛋白和5个RNA 聚合酶σ因需要合成关键的转录调节蛋白 Spo0A 并通过磷酸化过一种或两种酶就能够发生，而是通过磷酸化的复杂质 Spo0F 的磷酸化是通过至少 5 种不同的自动激酶在递送至 Spo0A 之前转移至 Spo0B。Spo0F~P 和 Sp化本身必须先被一种尚不明确的信号所激活，这些外部环境例如细胞密度、营养饥饿和细胞周期等结 在早期母细胞发育中芽孢的形成起关键作用[12]。一旦孢形成过程。Spo0A~P 可以直接激活或抑制超过 12400 种基因，所有这些都是芽孢形成特异性和/或稳定，芽孢形成的另一个关键正调节因子，σH是过渡阶段）和芽孢形成进入所必需的。
芽孢杆菌的芽孢形态的芽孢从母细胞释放后，通常具有球形或椭圆形，平均直径为 1微镜下，枯草芽孢杆菌芽孢显示出三种主要结构：核心，芽孢皮衣壳围绕皮层组装，在芽孢对有机溶剂和溶菌酶的抗性中起着重中，涂层表现为一系列的同心层，分为两个主要层：厚的高电子的电子密度较小的内涂层。在电子显微镜下，内涂层显示出细小轻微斑点。它由多层组成（2 层~5 层之间，通常约 4 层），宽约包围，宽度约 70~200 nm，斑点比内层颜色更深，外观更加粗糙两个主要的涂层外，在电子显微镜照片上可以看到内层和皮层之这可能是芽孢衣的一部分，并被认为是内涂层。芽孢衣壳组分主芽孢干重约 10%，占总芽孢蛋白质的 25%[14]。最近，通过钌红染周围的另一种结构--糖蛋白层（图 1.3A）。这种结构与芽孢外壳的，可能代表芽孢表面的初始外芽孢[15]。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cloning, Expression and Identification of a New Trehalose Synthase Gene from Thermobifida fusca Genome[J]. Yu-Tuo WEI, Qi-Xia ZHU1, Zhao-Fei LUO1, Fu-Shen LU1, Fa-Zhong CHEN1, Qing-Yan WANG1, Kun HUANG,Jian-Zhong MENG, Rong WANG, and Ri-Bo HUANG*Guangxi Key Laboratory of Subtropical Bioresource Conservation and Utilization, Guangxi University, Nanning 530004, China; 1Sinozyme Biotech Co. Ltd., Nanning 530004, China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2004(07)
[2]一种对斑点和条带信号进行半定量图像分析的简便方法[J]. 张成岗,袁守军,邓美玉,李林,汤仲明,贺福初. 中国体视学与图像分析. 2001(03)
本文编号：2896544
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