壳聚糖/纤维素球珠在组氨酸标签蛋白分离纯化的应用研究

发布时间：2021-01-14 00:52

　　随着基因工程技术的快速发展,大量的重组蛋白通过基因重组技术所生产,然而从复杂的混合体系中将目标蛋白分离纯化出来是一项复杂而艰巨的任务。研究和开发新型的蛋白分离纯化介质以及经济、快速、简便的分离纯化体系,对于实现蛋白质的工业化生产和商业化应用具有重要理论和实践意义。本论文以壳聚糖和纤维素为起始原料,利用绿色溶剂离子液体（1-丁基-3-甲基咪唑）氯盐（[BMIM]Cl）作为溶解体系,制备得到蛋白分离纯化介质壳聚糖/纤维素球珠（CCB）,弥补了壳聚糖粉末颗粒微小、刚性不足、不易回收利用等缺点;随后对其进行各项结构、特征进行表征,在固定化金属离子亲和层析（IMAC）原理的基础上进一步将其应用于组氨酸标签蛋白分离纯化。主要研究内容和结果如下:（1）考察了不同壳聚糖和纤维素比例对球珠成球性的影响,结果表明:当壳聚糖与纤维素的比例为4:1时,得到直径为3 mm的形状规则的球珠。随后利用傅里叶红外变换光谱（FT-IR）对其进行官能团分析,结果显示CCB在成型的过程中,壳聚糖和纤维素主要以分子链上的羟基通过氢键的形式进行交联;透射电镜（TEM）显示壳聚糖和纤维素分别呈现的是球状、针状形态,而CCB为两者... 

【文章来源】：浙江工商大学浙江省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１?ＩＭＡＣ和组氨酸标签蛋Ｈ亲和示怠图??Ｆｉｇ．?１－１?Ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ａｆｆｉｎｉｔｙ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｔｈｅ?ｈｉｓ－ｔａｇｇｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ａｎｄ?ＩＭＡＣ??

图２－３?＋同组分比例的壳聚糖／纤维素球珠外观形貌图??Ｆｉｇ．?２－３?Ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ?ｏｆ?ｃｈｉｔｏｓａｎ／ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－ｂａｓｅｄ?ｂｅａｄ?（ＣＣＢ）??结合表２－２和图２－３可以看出，随着纤维素的加入，有利于球珠的形成，说??明纤维素的加入有利于球珠的刚性的增加，这是由于纤维素分子有极性，分子链??之间的相互作用力很强，其中六元的吡喃结构致使旋转困难，并且分子内和分子??间都能形成氢键致使糖苷键不能旋转，从而使得刚性增加；但纤维素加入过多的??时候（即ＣＥＬ：ＣＳ大于１：１时），反而使得球珠的拖尾状态突出；而当混合体系中??ＣＳ：ＣＥＬ大于或者等于１：１时，球珠具有较好的成型性，随着反应体系中壳聚糖??的量增多，所形成的球珠颗粒越来越饱满，富有弹性，结构也越来越紧凑；当??ＣＳ：ＣＥＬ为４：１时

Ｆｉｇ．?２－４?ＦＴ－ＩＲ?ｏｆ?ｃｈｉｔｏｓａｎ?（ａ），?ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ?（ｂ），?ＣＣＢ?（ｃ）?ａｎｄ?Ｃｕ２＋－ＣＣＢ?（ｄ）??２．４．３．３壳聚糖／纤维素球珠（ＣＣＢ）的热重曲线分析（ＴＧＡ）??壳聚糖、纤维素和ＣＣＢ的热重分析曲线如图２－５所示，从图中可以看出，??壳聚糖和ＣＣＢ的热稳定性十分相似，但要比纤维素低。然而，在３３０?°Ｃ之后，??其热稳定性呈现了一个逆反的趋势，温度在３３０°Ｃ到４００?°Ｃ之间，纤维素在第??二阶段的降解过程出现了一个急剧的下降过程，这个过程的失重率大约为７８％，??这跟Ｔｒａｎ等＿人的报道相一致。从２８０?°Ｃ到６００°Ｃ之间，壳聚糖的第二阶段的??降解过程可以解释为壳聚糖骨架在相对高温的条件下出现了急剧的降解，失重率??大约为５０％。??从图２－５可以得出，与壳聚糖的热重曲线相比，ＣＣＢ在２６０?°Ｃ内的失重率??较小，表现出良好的稳定性。这可能是由于壳聚糖和纤维素发生交联，壳聚糖和??纤维素分子之间存在着较强的相互作用的结果。??１８??


本文编号：2975876