巴斯德毕赤酵母HOT在MAPK/HOG信号通路及甲醇代谢中的调控机理
发布时间：2021-01-16 21:06
嗜甲醇巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris,P.pastoris）是使用最为广泛的真核表达系统之一。其高效的醇氧化酶1启动子(Promoter of alcohol oxidase 1,PAOX1)可被甲醇强烈诱导但同时也被甘油等碳源强烈抑制,而甲醇作为一种化工原料,其大规模应用具有易燃易爆、碳源利用率低等缺陷。与甲醇相比,甘油等碳源具有易于代谢,还原力强等明显优势,因此构建甘油去阻遏型P.pastoris表达系统具有很高的应用价值,但需要从分子层面理解甘油抑制PAOX1机制。酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae,S.cerevisiae）中,HOT1是MAPK/HOG信号通路中重要的转录因子,直接参与对多种甘油相关基因的调控,因此推测其在毕赤酵母中参与调控甲醇代谢。然而毕赤酵母MAPK/HOG信号通路的调控机制尚不清楚,HOT蛋白在MAPK/HOG信号通路及甲醇代谢中的调控机理需要深入研究。基于此,本文鉴定了P.pastoris中高渗诱导转录因子HOT1和HOT2,并对其发挥作用的分子机制以及对甲醇代谢的调控...
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
酿酒酵母中MAPK/HOG信号通路[39]
gRNA 设计采用在线网站设计，网站为 http://www.rgenomr 功能，选取 PAM type 物种：SpCas9 from Streptococcus pyogen击 Organism Type，点击 others，Komagataella pastoris；取 HOG1 和 HOT1/HOT2 的前 500 bp，并分别将序列输入 Qu 0，点击 Submit；出现 sgRNA 序列（23 bp，包含 NGG）列表中，选择较好的 tent：40-60%；Out-of-frame Score：≥66；Mismatches：0；取合适的 RGEN Target，如：AAGCAAGAGAAAGCCTTGGGCAAGAGAAAGCCTTGGA；击 Cas OFFfinder，把选取的 20 bp sgRNA 序列输入 Query Seq0，输入20 bp sgRNA序列，如AAGCAAGAGAAAGCCTTGGA，RNA 的脱靶效应，选择无脱靶效应的 sgRNA。 质粒构建思路如图 2-1 所示，在引物的 3’端设计同源臂，通过段，之后通过 Gibson 组装的方法将片段组装至载体骨架上形成
江南大学硕士学位论文第三章 结果与讨论oris中HOT蛋白的鉴定及功能研究oris HOT1/HOT2 的生物信息学分析酵母 HOT1 为模板利用 NCBI 数据库中 BLAST 功能寻找 P. 列表中共两个基因，基因 ID 分别为：254565367 和 25455738在不同的基因组注释中均被注释为 HOT1，为了加以区为 HOT1，2545573854 称为 HOT2。
【参考文献】：
博士论文
[1]毕赤酵母醇氧化酶启动子调控相关激酶的研究与应用[D]. 沈伟.华东理工大学 2017
[2]毕赤酵母AOX1启动子转录调控机制研究[D]. 王小龙.华东理工大学 2016
[3]甘油去阻遏表型巴斯德毕赤酵母（Pichia Pastoris）的构建及其初步研究[D]. 姚学勤.中国人民解放军军事医学科学院 2009
硕士论文
[1]甘油对巴斯德毕赤酵母甲醇代谢影响的转录组学研究[D]. 李翔.江南大学 2018
[2]谷氨酸棒杆菌表达组件的开发及应用[D]. 赵子豪.江南大学 2017
本文编号：2981535
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
酿酒酵母中MAPK/HOG信号通路[39]
gRNA 设计采用在线网站设计，网站为 http://www.rgenomr 功能，选取 PAM type 物种：SpCas9 from Streptococcus pyogen击 Organism Type，点击 others，Komagataella pastoris；取 HOG1 和 HOT1/HOT2 的前 500 bp，并分别将序列输入 Qu 0，点击 Submit；出现 sgRNA 序列（23 bp，包含 NGG）列表中，选择较好的 tent：40-60%；Out-of-frame Score：≥66；Mismatches：0；取合适的 RGEN Target，如：AAGCAAGAGAAAGCCTTGGGCAAGAGAAAGCCTTGGA；击 Cas OFFfinder，把选取的 20 bp sgRNA 序列输入 Query Seq0，输入20 bp sgRNA序列，如AAGCAAGAGAAAGCCTTGGA，RNA 的脱靶效应，选择无脱靶效应的 sgRNA。 质粒构建思路如图 2-1 所示，在引物的 3’端设计同源臂，通过段，之后通过 Gibson 组装的方法将片段组装至载体骨架上形成
江南大学硕士学位论文第三章 结果与讨论oris中HOT蛋白的鉴定及功能研究oris HOT1/HOT2 的生物信息学分析酵母 HOT1 为模板利用 NCBI 数据库中 BLAST 功能寻找 P. 列表中共两个基因，基因 ID 分别为：254565367 和 25455738在不同的基因组注释中均被注释为 HOT1，为了加以区为 HOT1，2545573854 称为 HOT2。
【参考文献】：
博士论文
[1]毕赤酵母醇氧化酶启动子调控相关激酶的研究与应用[D]. 沈伟.华东理工大学 2017
[2]毕赤酵母AOX1启动子转录调控机制研究[D]. 王小龙.华东理工大学 2016
[3]甘油去阻遏表型巴斯德毕赤酵母（Pichia Pastoris）的构建及其初步研究[D]. 姚学勤.中国人民解放军军事医学科学院 2009
硕士论文
[1]甘油对巴斯德毕赤酵母甲醇代谢影响的转录组学研究[D]. 李翔.江南大学 2018
[2]谷氨酸棒杆菌表达组件的开发及应用[D]. 赵子豪.江南大学 2017
本文编号：2981535
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/hxgylw/2981535.html
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