玉米胚芽抗氧化肽的分离纯化与结构鉴定及体外模拟消化吸收的研究

发布时间：2021-02-28 13:16

　　本研究属于长春市科技计划项目-《玉米胚芽粕资源综合利用开发系列食品的生产关键技术研究》（14NK005）的一部分。本论文以玉米胚芽粕为研究对象,通过酶解、超滤和G-25凝胶色谱分离技术得到多个组分,以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率和抗氧化能力指数（ORAC-FL）为指标评价各组分的抗氧化活性从而得到活性最优组分。利用MS/MS技术确定最优组分的氨基酸序列,采用固相合成技术对其进行化学合成。随后以细胞内抗氧化活性（CAA）、细胞氧化损伤模型、细胞内氧自由基ROS水平和羟基自由基清除率为指标评价化学合成肽的抗氧化活性。最后通过体外模拟胃肠液消化和建立Caco-2细胞吸收模型探究其胃肠液稳定性以及吸收转运特性,为其综合利用提供理论依据。本研究所获成果如下:（1）在玉米胚芽抗氧化肽的分离纯化与结构鉴定中,玉米胚芽粕首先经过酶解、超滤得到五种组分:CGMH-1（大于30 kDa）,CGMH-2（10-30 kDa）,CGMH-3（3-10 kDa）,CGMH-4（1-3 kDa）和CGMH-5（小于1 kDa）。以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率和ORAC-FL为指标评估这... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：102 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩写表
第1章 绪论
    1.1 玉米胚芽粕的研究进展
        1.1.1 玉米胚芽粕的营养价值
        1.1.2 玉米胚芽粕的研究现状
    1.2 食源性抗氧化肽的研究进展
        1.2.1 食源性抗氧化肽的来源与制备
        1.2.2 抗氧化活性的评价方法
    1.3 体外模拟消化的研究进展
        1.3.1 体外模拟消化的概述
        1.3.2 体外模拟消化的研究现状
    1.4 体外吸收模型的研究进展
        1.4.1 体外吸收模型方法的研究现状
        1.4.2 体外吸收机制的研究进展
    1.5 论文研究内容
        1.5.1 研究意义
        1.5.2 研究内容
        1.5.3 研究路线
第2章 玉米胚芽抗氧化肽的分离纯化与结构鉴定
    2.1 材料与设备
        2.1.1 材料与试剂
        2.1.2 仪器与设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 玉米胚芽抗氧化肽的酶解
        2.2.2 玉米胚芽蛋白酶解液的超滤
        2.2.3 DPPH自由基清除率的测定
        2.2.4 ABTS自由基清除率的测定
        2.2.5 抗氧化能力指数法（ORAC-FL）的测定
        2.2.6 玉米胚芽抗氧化肽的Sephadex G-25 凝胶色谱分离
        2.2.7 玉米胚芽抗氧化肽的结构鉴定
        2.2.8 玉米胚芽抗氧化肽的化学合成
        2.2.9 数据统计与分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 玉米胚芽粕酶解液超滤后各组分的抗氧化活性评价
        2.3.2 CGMH-5 的凝胶层析图谱
        2.3.3 Sephadex gel-25 凝胶色谱分离后各组分的抗氧化活性评价结果
        2.3.4 玉米胚芽抗氧化肽氨基酸序列鉴定结果
        2.3.5 玉米胚芽抗氧化肽合成及检测结果
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
第3章 玉米胚芽抗氧化肽的活性评价
    3.1 材料与设备
        3.1.1 材料与试剂
        3.1.2 仪器与设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 HepG2 细胞的培养
        3.2.2 MTT法细胞毒性检测
        3.2.3 细胞内抗氧化活性（CAA）的测定
        3.2.4 过氧化氢损伤模型的构建
        3.2.5 抗氧化肽对过氧化氢损伤模型的影响
        3.2.6 细胞内活性氧自由基ROS的检测
        3.2.7 清除羟基自由基活性的测定
        3.2.8 数据统计与分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 抗氧化肽对HepG2 细胞活力的影响
        3.3.2 细胞内抗氧化活性（CAA）的实验结果
        3.3.3 过氧化氢损伤模型的实验结果
        3.3.4 抗氧化肽对过氧化氢损伤模型的影响
        3.3.5 细胞内活性氧自由基ROS的检测结果
        3.3.6 清除羟基自由基活性的实验结果
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
第4章 MGGN和 MNN的体外模拟消化和吸收的研究
    4.1 材料与设备
        4.1.1 材料与试剂
        4.1.2 仪器与设备
    4.2 实验方法
        4.2.1 模拟胃液消化实验
        4.2.2 模拟肠液消化实验
        4.2.3 Caco-2 细胞的培养
        4.2.4 Caco-2 细胞单层膜的培养
        4.2.5 Caco-2 细胞单层膜评价
        4.2.6 MGGN和MNN对Caco-2细胞毒性实验
        4.2.7 Caco-2细胞膜的吸收实验
        4.2.8 Caco-2 细胞膜的吸收机制研究
        4.2.9 RP-HPLC检测方法
        4.2.10 数据分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 消化过程中MGGN和 MNN含量变化的结果
        4.3.2 Caco-2 细胞膜跨膜电阻值的变化
        4.3.3 Caco-2 细胞膜的分化极性
        4.3.4 Caco-2 细胞膜的通透性
        4.3.5 Caco-2 细胞膜的激光扫描共聚焦显微镜观察结果
        4.3.6 MGGN和 MNN对 Caco-2 细胞的毒性实验结果
        4.3.7 MGGN和 MNN的吸收转运实验结果
        4.3.8 MNN的吸收转运机制实验结果
    4.4 讨论
    4.5 本章小结
第5章 结论
    5.1 全文结论
    5.2 创新点
    5.3 展望
参考文献
导师简介
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]不同烹饪方式及体外模拟消化对凡纳滨对虾主要过敏原原肌球蛋白免疫活性的影响[J]. 黄天娇,王梦梦,高永艳,卢瑛.  水产学报. 2019(11)
[2]3种不同来源蛋白质的氨基酸组成及体外动态消化研究[J]. 陈智仙,张海波,张双庆,张彦.  河南工业大学学报(自然科学版). 2019(02)
[3]鲍鱼内脏蛋白的提取及水解肽的抗氧化活性研究[J]. 梁杰,赵晓旭,汪秀妹,杨志强,汪少芸.  食品工业科技. 2019(08)
[4]松仁清蛋白抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定[J]. 卢红妍,杨行,方丽,刘诗梦,闵伟红.  食品科学. 2019(24)
[5]天然牛黄、体外培育牛黄和人工牛黄中胆汁酸类成分及其在人肠源Caco-2细胞模型中吸收转运的对比研究（英文）[J]. 陈颖,胡晓茹,程显隆,马双成,冉庆森,杨庆,强伟杰,戴忠,朱晓新.  Digital Chinese Medicine. 2018(04)
[6]玉米胚芽粕清蛋白酶解产物的制备及其抗氧化活性和护肝作用[J]. 于亚莉,宋雪梅,王莹,刘静波.  中国食品学报. 2018(06)
[7]基于大鼠离体外翻肠囊模型考察杜仲提取物在正常和自发性高血压状态下的肠吸收特性差异[J]. 吴林霖,李梅,巩仔鹏,陈亭亭,鲍红松,陈艳,胡贺佳,李月婷,李春,王爱民,李勇军,王永林.  中国实验方剂学杂志. 2018(09)
[8]Calcium glycerophosphate preserves transepithelial integrity in the caco-2 model of intestinal transport[J]. Palika Datta,Margaret T Weis.  World Journal of Gastroenterology. 2015(30)
[9]玉米胚芽蛋白水解物的抗氧化活性研究[J]. 王霞,丁继峰,鹿保鑫,张东杰.  中国酿造. 2013(06)
[10]玉米胚芽粕在动物营养中的研究进展[J]. 张乐乐,胡文婷,王宝维.  饲料博览. 2011(03)

博士论文
[1]基于HepG2细胞实验方法解析PEF技术改变抗氧化肽活性的机理研究[D]. 梁荣.吉林大学 2018

硕士论文
[1]玉米抗氧化肽的分离纯化与结构鉴定及其完整吸收研究[D]. 姜源.吉林大学 2018
[2]白藜芦醇W/O/W运载体系的构建及其吸收转运机制研究[D]. 王珺.中国农业科学院 2018
[3]星油藤蛋白肽的制备及其抗氧化活性研究[D]. 李林芽.河南工业大学 2016
[4]蛋清源ACE抑制肽的结构与完整吸收关系研究[D]. 丁龙.吉林大学 2015
[5]玉米胚芽抗氧化肽的制备及其安全性评价研究[D]. 赵会燕.吉林大学 2015



本文编号：3055905