重组木葡聚糖酶CkXgl74A的克

发布时间：2021-03-01 17:41

　　木葡聚糖酶作为来源广泛的一类水解酶不仅能在植物生长过程作为细胞壁的支撑材料调控植物生长,同时可以水解半纤维素原料应用于生物能源乙醇的生产、在食品行业中作为添加剂增加产品的粘稠度、啤酒发酵等行业降解发酵产生的木葡聚糖、饲料生产中降解原料中的半纤维素,降低生产成本等。但目前对其研究主要集中在产酶菌株的筛选和结构的研究,对耐热耐酸性能的木葡聚糖酶鲜有报道,因此对木葡聚糖酶进行研究具有重要的应用价值和意义。本研究成功构建了三个重组木葡聚糖酶的表达载体,并在大肠杆菌中进行了表达与纯化,测定了重组酶的相关酶学性质,主要结果如下:微生物Caldicellulosiruptor kronotskyensi生长于极热环境下,它能够产生多种耐热的半纤维素酶,将该微生物产生的木葡聚糖酶基因ckxgl74A成功构建至p ET-28a载体后克隆到大肠杆菌DH5α中,然后导进大肠杆菌BL21（DE3）中,表达出83.7 k Da大小的蛋白,与目的蛋白预期大小一致,该重组酶的最适反应温度为80℃,最适反应p H 5.5,该酶在50-70℃下保温1 h能保持60%的酶活。在p H 5.5的条件下保温2 h能保持80%... 

【文章来源】：淮阴工学院江苏省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 半纤维素概述
        1.1.1 半纤维素简介
        1.1.2 半纤维素水解与应用
    1.2 木葡聚糖酶概述
        1.2.1 木葡聚糖酶简介
        1.2.2 木葡聚糖酶研究现状
        1.2.3 木葡聚糖酶应用
    1.3 碳水化合物结合模块（CBM）概述
        1.3.1 CBM简介
        1.3.2 CBM应用与研究进展
    1.4 选题背景和研究意义
    1.5 研究内容
第二章 重组木葡聚糖酶CkXgl74A表达纯化及酶学性质测定
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 菌株与试剂
        2.2.2 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 序列分析
        2.3.2 构建原核表达载体
        2.3.3 重组木葡聚糖酶CkXgl74A表达与纯化
        2.3.4 标准曲线绘制
        2.3.5 酶学性质测定
        2.3.6 酶促动力学参数研究
        2.3.7 底物特异性研究
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 实验结果
        2.4.2 结论与分析
第三章 重组木葡聚糖酶中CBM模块差异的研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料
    3.3 实验方法
        3.3.1 重组表达载体构建
        3.3.2 表达与纯化
        3.3.3 酶学性质测定
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 实验结果
        3.4.2 结论与分析
第四章 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 展望
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3057807