谷氨酰胺酶合成γ-谷氨酰肽及其抗氧化性的研究

发布时间：2021-03-03 09:36

　　γ-谷氨酰肽是由谷氨酰胺或谷氨酸的γ-羧基和氨基酸或肽分子的α-氨基发生脱水缩合反应所得的一类小分子肽,广泛存在于自然界的动植物和微生物中。γ-谷氨酰肽可从天然物质中提取得到,也可通过化学合成法制备得到,但酶法合成法是应用更为广泛的制备γ-谷氨酰肽的方法,γ-谷氨酰转肽酶（γ-glutamyl transpeptidase,γ-GGT）是最为常用、研究最为深入的一种酶制剂。已有研究证明,部分微生物来源的谷氨酰胺酶也能催化γ-谷氨酰基转移反应,但关于将其应用于合成γ-谷氨酰肽的研究则是近年来才有所进展,对谷氨酰胺酶合成γ-谷氨酰肽的研究可扩大谷氨酰胺酶的应用范围,同时也可为合成γ-谷氨酰肽提供新的酶制剂来源,在实际的生产应用中具有重要意义。在此基础上,本论文利用解淀粉芽孢杆菌来源的谷氨酰胺酶,分别以半胱氨酸和色氨酸为γ-谷氨酰基受体,谷氨酰胺为γ-谷氨酰基供体,合成γ-谷氨酰肽并对合成条件进行了优化,探究了γ-谷氨酰肽的抗氧化活性。本论文首先探究了两种商用的解淀粉芽孢杆菌来源谷氨酰胺酶的酶学特性。结果表明,酶A和酶B均能催化水解和转肽反应,在pH 10.0、温度37℃的条件下,其水解酶活... 

【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：108 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 谷氨酰胺酶的概述
    1.2 γ-谷氨酰肽的概述
    1.3 天然的γ-谷氨酰肽
    1.4 γ-谷氨酰肽的分析检测
    1.5 γ-谷氨酰肽的生理活性
        1.5.1 γ-谷氨酰肽与病理学指标
        1.5.2 γ-谷氨酰肽与神经系统
        1.5.3 γ-谷氨酰肽与炎症反应
        1.5.4 γ-谷氨酰肽与肝肾功能
        1.5.5 γ-谷氨酰肽与钙离子敏感受体的变构调节作用
        1.5.6 其他生理活性
    1.6 γ-谷氨酰肽的制备方法
        1.6.1 自然提取法
        1.6.2 化学合成法
        1.6.3 微生物发酵法
        1.6.4 酶合成法
    1.7 氧化应激与抗氧化肽
        1.7.1 活性氧簇的概述
        1.7.2 氧化应激与疾病
        1.7.3 抗氧化肽的研究现状
    1.8 本论文的立题依据和研究内容
        1.8.1 本论文的立题依据
        1.8.2 本论文的研究内容
第二章 两种谷氨酰胺酶的酶学特性研究
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 试剂与仪器
        2.2.2 实验方法
    2.3 结果与分析
        2.3.1 谷氨酰胺酶的水解及转肽酶活力
        2.3.2 pH对谷氨酰胺酶催化活性的影响
        2.3.3 pH对谷氨酰胺酶稳定性的影响
        2.3.4 温度对谷氨酰胺酶催化活性的影响
        2.3.5 温度对谷氨酰胺酶稳定性的影响
        2.3.6 盐含量对谷氨酰胺酶催化活性的影响
    2.4 本章小结
第三章 LX-1000EP环氧基树脂固定化谷氨酰胺酶的研究
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 试剂与仪器
        3.2.2 实验方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 溶剂pH对固定化效果的影响
        3.3.2 吸附时间对固定化效果的影响
        3.3.3 相对加酶量对固定化效果的影响
        3.3.4 响应面试验结果与分析
    3.4 本章小结
第四章 谷氨酰胺酶合成γ-谷氨酰肽的研究
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 试剂与仪器
        4.2.2 实验方法
    4.3 结果与分析
        4.3.1 γ-谷氨酰基受体的筛选结果
        4.3.2 UPLC-MS/MS分离鉴定反应液体系中的γ-谷氨酰肽
        4.3.3 HPLC检测反应液体系中的γ-谷氨酰肽
        4.3.4 pH对产物种类及产率的影响
        4.3.5 温度对产物种类及产率的影响
        4.3.6 酶添加量对产物种类及产率的影响
        4.3.7 反应时间对产物种类及产率的影响
        4.3.8 底物浓度对产物种类及产率的影响
        4.3.9 底物比例对产物种类及产率的影响
        4.3.10 降低产物浓度对γ-谷氨酰肽产率的影响
    4.4 本章小结
第五章 γ-谷氨酰肽及其酶促反应液的抗氧化性研究
    5.1 引言
    5.2 材料与方法
        5.2.1 试剂与仪器
        5.2.2 实验方法
    5.3 结果与分析
        5.3.1 γ-谷氨酰肽清除DPPH自由基的能力
        5.3.2 γ-谷氨酰肽的还原力
        5.3.3 γ-谷氨酰肽螯合Fe2+的能力
        5.3.4 γ-谷氨酰肽清除ABTS自由基的能力
        5.3.5 γ-谷氨酰肽清除超氧阴离子自由基（O2?-）的能力
        5.3.6 γ-谷氨酰化对氨基酸抗氧化活性的影响
    5.4 本章小结
结论与展望
    一、结论
    二、创新点
    三、展望
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
附件


【参考文献】：
期刊论文
[1]两种谷氨酰胺酶的酶学特性研究[J]. 卢慧茵,王炜,崔春.  中国调味品. 2018(10)
[2]食源性抗氧化肽分离纯化方法研究进展[J]. 盖莉莉,高丹丹,李明生,马洪鑫,程浩,田晓静,陈士恩.  食品安全质量检测学报. 2018(16)
[3]离子选择电极法测定谷氨酰胺酶活力研究[J]. 崔春,徐明,杨娟,王炜.  中国调味品. 2017(02)
[4]酶催化合成L-茶氨酸的研究进展[J]. 李元,刘珊,祝俊.  食品科学. 2017(23)
[5]γ-谷氨酰肽呈味特性、鉴定及制备方法研究进展[J]. 姚玉静,崔春,黄俊伟.  中国调味品. 2016(03)
[6]动物体内活性氧、氧化应激与细胞凋亡以及抗氧化剂研究进展[J]. 朱若岑,蒋维维,谭柱良,易金娥.  中兽医医药杂志. 2015(03)
[7]线粒体氧化应激与天然抗氧化剂研究进展[J]. 李兴太,纪莹.  食品科学. 2015(07)
[8]谷胱甘肽生物合成及代谢相关酶的研究进展[J]. 王玮玮,唐亮,周文龙,杨燕,高波,赵云峰,王伟.  中国生物工程杂志. 2014(07)
[9]抗氧化肽的构效关系研究进展[J]. 张晖,唐文婷,王立,钱海峰,齐希光.  食品与生物技术学报. 2013(07)
[10]发酵法生产谷胱甘肽的研究进展[J]. 汤亚杰,徐小玲,李冬生.  食品与发酵工业. 2007(01)

硕士论文
[1]酵母细胞通透性的调控及其合成谷胱甘肽研究[D]. 孙怡然.南昌大学 2018
[2]利用重组钝齿棒杆菌高效表达γ-谷氨酰转肽酶及酶催化合成L-茶氨酸研究[D]. 和斐.江南大学 2016
[3]酱油鲜味肽的分离纯化鉴定及呈味特性研究[D]. 庄明珠.华南理工大学 2015



本文编号：3061043