双柱连续流层析分离抗体的过程设计及应用研究

发布时间：2021-04-14 21:19

　　单抗是重要的生物技术药物,现有的蛋白A亲和层析的抗体纯化平台技术无法满足巨大的抗体市场需求,有必要开发新的分离方法。连续流层析是一种新型层析分离模式,是生物连续制造的重要环节,但对相关影响因素的研究还不够深入。本文围绕双柱连续流层析捕获抗体,探讨连续流层析分离的关键因素,比较传统批次层析和连续流层析的分离性能,分析不同蛋白A亲和介质在连续流层析分离单抗过程中的表现,为连续流层析过程开发和应用提供指导。以典型蛋白A亲和介质MabSelect SuRe与两种新型介质（Resin A和Resin B）为模型,考察了保留时间和蛋白浓度对双柱连续流层析过程的影响。结果表明,随保留时间增加,三种介质的产率都呈现先增加后减小的趋势,介质利用率则持续增加,双柱连续流层析的介质利用率（70%以上）远远高于批次层析过程（20～50%）,缓冲液消耗降低50%以上。而随着蛋白浓度增大,产率显著增大,介质利用率和缓冲液消耗则变化不大。比较三种介质,Resin B载量最高,拥有最好的分离性能,保留时间1 min时产率达到43.0 g/（L·h）。考察了三种介质用连续流层析从细胞培养液中分离单抗,结果显示单抗纯度、... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：108 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．３模拟移动床示意图??Ｆｉｇ．?１．３?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ａ?ｓｉｍｕｌａｔｅｄ?ｍｏｖｉｎｇ?ｂｅｄ??

（１）双柱连续流层析Ｃａｐｔｕｒｅ?ＳＭＢ系统??ＣｈｒｏｍａＣｏｎ公司推出双柱连续流层析Ｃａｐｔｕｒｅ?ＳＭＢ系统，使用两根层析进??行连续操作，被认为是最精简的连续流层析系统，具体步骤如图１．４所示。首先，??两根层析柱（１＃和２＃）以串联方式上祥（如图１．４中Ｓｔｅｐ?１），１＃层析柱流穿的??蛋白被２＃层析柱吸附；当１＃层析柱迗到设定的穿透点，将１＃层析柱未吸附的蛋??白冲洗到２＃层析柱，如图１．４中Ｓｔｅｐ２；然后将两根层析柱断开，１＃层析柱进行??淋洗、洗脱、再生、再平衡等步骤（ｒｅｃｏｖｅｒｙ－ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，?Ｒ－Ｒ），与此同时２＃层??析柱继续上样，如图１．４中Ｓｔｅｐ３所示，此时２＃层析柱的上样流速通常比双柱连??接模式上样时的流速低，以保证蛋白不会从２＃层析柱中流穿；待１＃层析柱完成??所有洗脱和再生步骤，将１＃层析柱串联至２＃层析柱后，２＃层析柱持续上样，该??过程与Ｓｔｅｐ?１类似

ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，?ＰＣＣ），包括３Ｃ－ＰＣＣ和４Ｃ－ＰＣＣ两种不同模式，分别使用３根??及４根层析柱。??３Ｃ－ＰＣＣ系统的具体步骤如图１．５所示，与Ｃａｐｔｕｒｅ?ＳＭＢ类似，也是采用两??根层析柱串联上样。首先，前两根层析柱（１＃和２＃）串联，进行上样，］＃层析柱??流穿的蛋白被２＃层析柱吸附，；与此同时３＃层析柱进行淋洗、洗脱、再生、再平??衡等步骤，如图１．５中Ｓｔｅｐｌ；当３＃层析柱再生完毕，１＃层析柱也达到预设的上??样量，将１＃层析柱与３＃层析柱串联，将１＃层析柱中未吸附的蛋白冲洗到３＃层析??柱，与此同时上样切换到２＃层析柱，以恒定速度上样，如图１．５中Ｓｔｅｐ２；待１＃??层析柱冲洗完毕，断开１＃层析柱与３＃层析柱，连接２＃层析柱与３＃层析柱，持续??上样，１＃层析柱进行淋洗、洗脱、再生、再平衡等步骤，如图１．３中Ｓｔｅｐ?３。然??后重复以上步骤

【参考文献】：
期刊论文
[1]双柱连续流层析亲和分离抗体的过程设计与应用[J]. 高宗晔,史策,姚善泾,林东强.  高校化学工程学报. 2019(01)
[2]逆体积排阻层析法测定层析介质的孔径分布[J]. 沈醉,林东强,姚善泾.  化工学报. 2010(04)

博士论文
[1]混合模式介质吸附抗体的选择性及分离应用研究[D]. 罗颖娣.浙江大学 2018



本文编号：3138034