酵母Svl3和Pam1蛋白在细胞壁形成过程中的功能研究

发布时间：2021-05-21 12:09

　　细胞壁是真菌有别于动物细胞的显著特征之一,但迄今为止真菌细胞壁的合成和组装机理尚不清楚。包括细胞壁的合成和组装在内的很多生物过程在真菌中高度保守。因此,本研究中以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）为模式生物对真核生物细胞壁的合成及组装过程进行了探索。酿酒酵母细胞常态下为营养细胞。营养细胞壁主要由从内到外的葡聚糖层和甘露聚糖层组成。在饥饿条件下,二倍体营养细胞形成单倍体孢子。孢子壁从内到外分别是甘露糖层,葡聚糖层,壳聚糖层和二酪氨酸层。外孢子壁蛋白2（Outer Spore Wall 2,Osw2）仅在酿酒酵母的产孢细胞中表达,是葡聚糖层和/或甘露聚糖层在孢子壁中正确组装所必需的。Osw2的N端可能有一个2-脱酮泛解酸2-还原酶结构域,在苯乙烯基染料液泡定位蛋白3（Styryl Dye Vacuolar Localization3,Svl3）和蛋白磷酸酶2A（Protein Phosphatase 2A,PP2A）的多拷贝抑制剂蛋白1（Pp2A Multicopy Suppressor,Pam1）的N端也存在该区域。Svl3和Pam1是酿酒酵母中的功能同源蛋白,... 

【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 酿酒酵母概述
        1.1.1 酿酒酵母的细胞壁
        1.1.2 酿酒酵母的孢子壁
    1.2 光滑念珠菌概述
        1.2.1 光滑念珠菌的细胞壁
    1.3 OSW2,PAM1,SVL3 基因概述
        1.3.1 参与酿酒酵母孢子壁合成与组装的蛋白
        1.3.2 Osw2,Pam1和Svl3 的关系
    1.4 本研究的立题意义和研究内容
        1.3.1 本研究的立题意义
        1.3.2 本研究的主要内容
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 质粒
        2.1.3 引物
        2.1.4 酶与试剂
        2.1.5 主要仪器设备
        2.1.6 培养基及主要溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 感受态的制备
        2.2.2 质粒的构建
        2.2.3 荧光检测方法
        2.2.4 CFW敏感性和温度敏感性测试
        2.2.5 光滑念珠菌的生长曲线测量方法
        2.2.6 光滑念珠菌的基因敲除方法
        2.2.7 酿酒酵母质粒的转化方法
        2.2.8 蛋白质免疫印迹
第三章 结果与讨论
    3.1 Svl3 及其同源蛋白Pam1 的理化属性分析
        3.1.1 svl3Δpam1Δ的细胞壁缺陷分析
        3.1.2 Svl3和Pam1 的定位
        3.1.3 Svl3蛋白的可溶性分析
    3.2 Svl3蛋白的功能分析
        3.2.1 Svl3的C端的功能
        3.2.2 Svl3的N端的功能
        3.2.3 Svl3中O-甘露糖基化修饰的功能
    3.3 光滑念珠菌中Svl3和Pam1 的同源蛋白的功能探索
        3.3.1 在酿酒酵母中表达光滑念珠菌中Svl3和Pam1 的同源蛋白
        3.3.2 光滑念珠菌Cgsvl3ΔCgpam1Δ双缺突变株的表型
主要结论与展望
    主要结论
    展望
致谢
参考文献
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的文章



本文编号：3199682