米曲霉脂肪酶基因在黑曲霉中的表达研究
发布时间：2021-06-14 02:17
丝状真菌由于具有与细菌、酵母不同的独特优点:具有与高等真核生物类似的很强的蛋白外分泌能力,能够进行正确的各种翻译后加工,因此被广泛应用于外源蛋白的高效表达。其中黑曲霉有较高的安全性可以被用于食品药品等领域,成为研究的热点。工业用脂肪酶的重要来源之一是微生物来源的脂肪酶,本实验室筛选到的一株产脂肪酶的米曲霉菌株WZ007,其脂肪酶基因aol（Gen Bank:KP975533）已成功在大肠杆菌表达系统和巴斯德毕赤酵母表达系统进行表达。为了进一步提高的米曲霉脂肪酶基因的表达,本课题尝试利用农杆菌介导的真菌表达系统实现其在黑曲霉中胞外分泌表达,并对其酶学性质进行研究,研究结果如下:1、表达米曲霉脂肪酶基因的黑曲霉工程菌的构建。首先将米曲霉脂肪酶aol目的基因与p CAMBIA-Pgpd A-Tcbh1-hph-Ptrp C载体连接并转化至大肠杆菌E.coli DH5α,筛选出阳性转化子。转化子测序验证后再提取质粒转化至农杆菌AGL-1感受态细胞,再PCR鉴定阳性转化子。将黑曲霉孢子悬浮液与农杆菌于22℃共培养48 h,随后转移到潮霉素B抗性筛选培养基,获得的黑曲霉阳性转化子,提取转化子的基因...
【文章来源】：浙江工业大学浙江省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AOL基因PCR验证电泳图
米曲霉脂肪酶在黑曲霉中的表达研究21因。图2-2HPH基因PCR验证电泳图Fig.2-2Verificationelectrophoresismapofhph泳道M：DL2000Marker;泳道1、2、3和4:hph抗性.以载体pCAMBIA-PgpdA-Tcbh1-hph-PtrpC为模板基因进行载体反向PCR，1.0%琼脂糖凝胶电泳如图2-3，条带大小在10000bp左右，大小正确。图2-3载体pCAMBIA-PgpdA-Tcbh1-hph-PtrpC基因PCR验证电泳图Fig.2-3VerificationelectrophoresismapofvectorpCAMBIA-PgpdA-Tcbh1-hph-PtrpC泳道M：2KplusⅡMarker;泳道1和2:载体基因
米曲霉脂肪酶在黑曲霉中的表达研究21因。图2-2HPH基因PCR验证电泳图Fig.2-2Verificationelectrophoresismapofhph泳道M：DL2000Marker;泳道1、2、3和4:hph抗性.以载体pCAMBIA-PgpdA-Tcbh1-hph-PtrpC为模板基因进行载体反向PCR，1.0%琼脂糖凝胶电泳如图2-3，条带大小在10000bp左右，大小正确。图2-3载体pCAMBIA-PgpdA-Tcbh1-hph-PtrpC基因PCR验证电泳图Fig.2-3VerificationelectrophoresismapofvectorpCAMBIA-PgpdA-Tcbh1-hph-PtrpC泳道M：2KplusⅡMarker;泳道1和2:载体基因
【参考文献】：
期刊论文
[1]米曲霉脂肪酶催化鱼油酯酯交换制备高含量EPA/DHA甘油酯的研究[J]. 郑建永,张石自,王升帆,李俊,汪钊. 中国油脂. 2017(07)
[2]抗除草剂海带孢子体培育技术的初步研究[J]. 王爱华,伊铖铖,姜国勇,邹积华,崔从光. 青岛农业大学学报(自然科学版). 2017(02)
[3]基于RNAi抗PRSV番木瓜株系的培育及其分子特征验证[J]. 黄静,贾瑞宗,孔华,郭静远,王绪朋,郭安平. 热带作物学报. 2017(03)
[4]米曲霉As-W6脂肪酶的分离纯化及酶学性质研究[J]. 王开萍,李红卫,吴娱,唐正江,汤飞,刘国庆. 食品工业科技. 2015(18)
[5]Tween 80诱导下米曲霉3.5232产胞内脂肪酶的研究[J]. 刘洪伟,许喜林,李晓凤. 现代食品科技. 2012(08)
[6]根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达[J]. 潘力,王云艳,王斌,何攀,李俊星. 华南理工大学学报(自然科学版). 2012(05)
[7]黑曲霉作为细胞工厂:知识准备与技术基础[J]. 郭艳梅,郑平,孙际宾. 生物工程学报. 2010(10)
[8]微生物发酵生产脂肪酶的研究进展[J]. 汪小锋,王俊,杨江科,闫云君. 生物技术通报. 2008(04)
[9]丝状真菌的DNA转化方法[J]. 苏彩云,靳发彬,张佳,丰枚枚,张春珍,王红怡,代明伟. 河北化工. 2007(07)
[10]提高微生物脂肪酶产量、活性和稳定性的方法研究[J]. 舒正玉,王爱玲,杨江科,闫云君. 工业微生物. 2007(03)
博士论文
[1]米曲霉脂肪酶的分离纯化、基因克隆、表达及其在维生素A合成中的应用研究[D]. 郑建永.浙江工业大学 2015
硕士论文
[1]白曲霉酸性蛋白酶在无孢黒曲霉SH-2中的表达研究[D]. 董文超.华南理工大学 2018
[2]基于CRISPR系统的丝状真菌基因组快速编辑[D]. 李丹丹.福州大学 2017
[3]产脂肪酶Aspergillus oryzae WZ007的诱变选育及其酶的分离纯化[D]. 刘虹才.浙江工业大学 2012
[4]微生物酶法制备芳氧苯氧丙酸酯类除草剂关键手性中间体的研究[D]. 姚侠.浙江工业大学 2012
[5]产脂肪酶菌株Aspergillus oryzae WZ007的诱变及其发酵条件的优化与应用[D]. 徐玮.浙江工业大学 2012
[6]细胞膜电穿孔现象机理研究[D]. 肖华娟.中国科学院研究生院（电工研究所） 2004
本文编号：3228850
【文章来源】：浙江工业大学浙江省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AOL基因PCR验证电泳图
米曲霉脂肪酶在黑曲霉中的表达研究21因。图2-2HPH基因PCR验证电泳图Fig.2-2Verificationelectrophoresismapofhph泳道M：DL2000Marker;泳道1、2、3和4:hph抗性.以载体pCAMBIA-PgpdA-Tcbh1-hph-PtrpC为模板基因进行载体反向PCR，1.0%琼脂糖凝胶电泳如图2-3，条带大小在10000bp左右，大小正确。图2-3载体pCAMBIA-PgpdA-Tcbh1-hph-PtrpC基因PCR验证电泳图Fig.2-3VerificationelectrophoresismapofvectorpCAMBIA-PgpdA-Tcbh1-hph-PtrpC泳道M：2KplusⅡMarker;泳道1和2:载体基因
米曲霉脂肪酶在黑曲霉中的表达研究21因。图2-2HPH基因PCR验证电泳图Fig.2-2Verificationelectrophoresismapofhph泳道M：DL2000Marker;泳道1、2、3和4:hph抗性.以载体pCAMBIA-PgpdA-Tcbh1-hph-PtrpC为模板基因进行载体反向PCR，1.0%琼脂糖凝胶电泳如图2-3，条带大小在10000bp左右，大小正确。图2-3载体pCAMBIA-PgpdA-Tcbh1-hph-PtrpC基因PCR验证电泳图Fig.2-3VerificationelectrophoresismapofvectorpCAMBIA-PgpdA-Tcbh1-hph-PtrpC泳道M：2KplusⅡMarker;泳道1和2:载体基因
【参考文献】：
期刊论文
[1]米曲霉脂肪酶催化鱼油酯酯交换制备高含量EPA/DHA甘油酯的研究[J]. 郑建永,张石自,王升帆,李俊,汪钊. 中国油脂. 2017(07)
[2]抗除草剂海带孢子体培育技术的初步研究[J]. 王爱华,伊铖铖,姜国勇,邹积华,崔从光. 青岛农业大学学报(自然科学版). 2017(02)
[3]基于RNAi抗PRSV番木瓜株系的培育及其分子特征验证[J]. 黄静,贾瑞宗,孔华,郭静远,王绪朋,郭安平. 热带作物学报. 2017(03)
[4]米曲霉As-W6脂肪酶的分离纯化及酶学性质研究[J]. 王开萍,李红卫,吴娱,唐正江,汤飞,刘国庆. 食品工业科技. 2015(18)
[5]Tween 80诱导下米曲霉3.5232产胞内脂肪酶的研究[J]. 刘洪伟,许喜林,李晓凤. 现代食品科技. 2012(08)
[6]根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达[J]. 潘力,王云艳,王斌,何攀,李俊星. 华南理工大学学报(自然科学版). 2012(05)
[7]黑曲霉作为细胞工厂:知识准备与技术基础[J]. 郭艳梅,郑平,孙际宾. 生物工程学报. 2010(10)
[8]微生物发酵生产脂肪酶的研究进展[J]. 汪小锋,王俊,杨江科,闫云君. 生物技术通报. 2008(04)
[9]丝状真菌的DNA转化方法[J]. 苏彩云,靳发彬,张佳,丰枚枚,张春珍,王红怡,代明伟. 河北化工. 2007(07)
[10]提高微生物脂肪酶产量、活性和稳定性的方法研究[J]. 舒正玉,王爱玲,杨江科,闫云君. 工业微生物. 2007(03)
博士论文
[1]米曲霉脂肪酶的分离纯化、基因克隆、表达及其在维生素A合成中的应用研究[D]. 郑建永.浙江工业大学 2015
硕士论文
[1]白曲霉酸性蛋白酶在无孢黒曲霉SH-2中的表达研究[D]. 董文超.华南理工大学 2018
[2]基于CRISPR系统的丝状真菌基因组快速编辑[D]. 李丹丹.福州大学 2017
[3]产脂肪酶Aspergillus oryzae WZ007的诱变选育及其酶的分离纯化[D]. 刘虹才.浙江工业大学 2012
[4]微生物酶法制备芳氧苯氧丙酸酯类除草剂关键手性中间体的研究[D]. 姚侠.浙江工业大学 2012
[5]产脂肪酶菌株Aspergillus oryzae WZ007的诱变及其发酵条件的优化与应用[D]. 徐玮.浙江工业大学 2012
[6]细胞膜电穿孔现象机理研究[D]. 肖华娟.中国科学院研究生院（电工研究所） 2004
本文编号：3228850
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/hxgylw/3228850.html
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