假灰绿曲霉酸性蛋白酶Aspergillopepsin Ⅰ的表达及蛋白水解

发布时间：2021-06-23 22:05

　　酸性蛋白酶是一类在酸性条件下具有水解活性的蛋白酶,由于其活性中心有两个天冬氨酸基团,因此也称为天冬氨酸蛋白酶。酸性蛋白酶能在酸性条件下高效水解蛋白,广泛应用于食品生产、饲料生产、皮毛与皮革加工、医药等行业,具有良好的工业应用前景。本研究克隆了假灰绿曲霉（Aspergillus pseudoglaucus）酸性蛋白酶AspergillopepsinⅠ成熟肽基因和带有前导肽的成熟肽基因,构建重组表达质粒,于大肠杆菌（Escherichia.coli BL21）中表达,结果表明前导肽对蛋白的表达具有重要影响。研究了不同的表达载体和不同来源的前导肽对酸性蛋白酶表达与功能的影响,考察了重组酸性蛋白酶的酶学性质,优化了其水解大豆蛋白和乳蛋白的条件,为微生物酸性蛋白酶的理论研究和工业应用提供了较好的研究基础。具体研究内容包括:（1）以合成得到的A.pseudoglaucus酸性蛋白酶AspergillopepsinⅠ全基因为模板克隆获取成熟肽基因（App）和带有前导肽的酸性蛋白酶基因（proApp）,同时通过重叠延伸PCR方法将Candida tropicalis的Candidapepsin的前导肽... 

【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同的微生物酸性蛋白酶的氨基酸序列比对Fig.1-1SequencealignmentofacidicproteasesfromdifferentmicroorganismsXP_001401093.1,ProteaseBofA.niger;pdb|1BXO|A,AcidproteinasefromP.janthinellum;pdb|1IZE|A,AsparticproteinasefromA.oryze;ACL68091.1,Rhizopuspepsin4fromR.oryzae;prf

表 1-1 不同的微生物酸性蛋白酶的最适反应条件和稳定性比较parison of optimum reaction conditions and stability of acidic proteases from白酶来源 最适反应温度（°C）最适反应pH温度稳定范围（°C）pH 稳定范围clavatus 50 5.5 45–55 3.5–6.5zae (MTCC 55 3.2 40–57 2.5–6.0awachii 50 3.0 25 3.0–4.0nnebergii 50 4.0 30–60 3.0–5.0 oryzae 60 5.5 30–45 5.5–7.5zae LK-101 50 6.5 20–40 4.5–7.5sus pilosus 55 2.5–3.0 25–55 2.5–6.0射线晶体学分析各种天冬氨酸蛋白酶，结果显示它们的活性位有催化活性天冬氨酸残基（图 1-2），因此抑制剂通过酯化到抑制效果。


本文编号：3245738