纳豆激酶高产菌诱变选育及发酵工艺优化

发布时间：2021-07-21 22:00

　　纳豆激酶是纳豆芽孢杆菌产生的一种丝氨酸蛋白酶,于日本纳豆食品中发现的。经研究发现,纳豆激酶具有溶解血栓的功能,可作为治疗和预防血栓性疾病药物。本研究是从日本进口纳豆食品中筛选到一株纳豆激酶活性高的菌株,采用紫外诱变筛选出突变株并提高酶活大小,并对突变株进行发酵工艺优化,为以后纳豆激酶工业化生产提供参考。研究内容和结果如下:本试验使用酪蛋白平板初筛,纤维蛋白平板进行复筛,从日本北海道生产的纳豆食品最终筛选到了5株产纳豆激酶的菌株,其中菌株XD2的酶活最高,为989.3 U/mL。对菌株进行16S rDNA分子鉴定,菌株XD2与枯草芽孢杆菌同源性达99%。结合系统进化树确定菌株XD2是枯草芽孢杆菌。以原始菌株XD2为出发菌株,通过紫外诱变,根据酶活大小筛选突变菌株。确定了最佳紫外照射时间为150 s,致死率为84.09%。在该条件下筛选到6株菌株,其中突变株XD7的酶活最高,达到1137.15 U/mL。相比于原始菌株XD2,酶活提高了15%。对其进行了5次传代,酶活变化不大,说明其遗传稳定性。从发酵曲线看出纳豆激酶是生长关联性代谢产物,综合分析确定后续发酵时间为48 h。以突变株XD7为... 

【文章来源】：武汉工程大学湖北省

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

凝血的过程

图 2-1 尿激酶标准曲线Fig.2-1 Standard curve of urokinase由图2-1所示，尿激酶标准曲线的线性方程为y=2.0849x-616.25，R2=99.84,说明尿激酶酶活大小与透明圈面积呈线性关系。2.3.3 菌株 XD2 的酶活结果表 2-4 菌株 XD2 酶活大小Table 2-4 The enzyme activity of strain XD2菌株编号 透明圈直径/mm 酶活（U/mL）XD2 27.75 989.3由表 2-4 可知，根据尿激酶标准曲线，得到菌株 XD2 酶活大小为 989.3 U/mL。

图 2-2 菌落 XD2 形态特征Fig.2-2 Morphological characteristics of XD2 2-2 所示，菌落的外形是近似圆形，颜色为白色或乳白扁平，边缘不整齐，形状为褶皱状，中间有凸起，像火明。株 XD2 的分子生物学鉴定 XD2 PCR 产物电泳结果如图 2.3 所示。其中 M 表0 DNAMarker，1、2、3 和 4 都是菌株 XD2 PCR 产物。

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：3295842