BR蛋白高产菌株的诱变选育及工艺优化

发布时间：2021-08-06 07:09

　　盐沼盐杆菌（Halobacterium salinarium）在细胞膜上可合成细菌视紫红质（BR）,BR蛋白具有光敏性。在光照条件下,BR蛋白分子迅速发生一系列分子构型变化,再经过构型及中间体的转换回到最初状态,光循环完成。研究发现,BR蛋白是一种光敏蛋白,广泛应用于光电转换器、信号储存器、生物新兴材料等方面,具有广阔的应用前景。论文以盐沼盐杆菌F0为出发菌株,依次进行紫外诱变、微波诱变及常压等离子体诱变。首先进行紫外（UV）诱变,使用功率为20 W的紫外灯,处理时间3 min,样品与灯管垂直高度为30 cm,获得一株高产BR蛋白变异株UV53,其BR蛋白产量为67.65mg/L,相比原始菌株F0（BR蛋白产量为49.98 mg/L）产BR蛋白产量能力提高了35.35%;然后对突变株UV53进行微波诱变,使用功率为900 W的微波炉,脉冲频率2450 MHz,处理时间110 s,获得一株高产BR蛋白突变株W75,其BR蛋白产量为94.87 mg/L,比出发菌株F0（BR蛋白产量为49.98 mg/L）产BR蛋白能力提高了89.81%;最后使用ARTP诱变系统诱变W75,功率设置为120... 

【文章来源】：河南大学河南省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

盐沼盐杆菌的菌落Fig.1-1ThecolonyofHalobacteriumsalinarium

2.4.6 高产突变株 AP33 的 BR 蛋白基因片段分析由上海生工测序结果可知，高产菌株 AP33 与原始菌株 F0 的 BR 基因相比，碱基序列无变化，基因序列未发生改变。高产菌株 AP33 合成的 BR 蛋白与原始菌株一致，未改变其性质。

氨基酸的检测使用 A300 氨基酸自动分析仪，分离模式采用浓度梯度和温度梯度相合；缓冲液的流速设置为 0.18 mL/min，其中茚三酮的流速为 0.09 mL/min；进样量为0 μL，柱温 40℃；检测器波长 570 nm/440 nm，4.4 结果与分析4.4.1 20 种氨基酸混合标准液检测分析参照 4.3.1 中的检测方法，取 20 μL 20 种标准游离氨基酸混合液进行检测，采用锂系统分析，20 种标准游离氨基酸的分离图谱，如图 4-1。从图中可以看出，图谱基线稳，氨基酸的峰型整齐，未出现平头峰；标品中的 20 种氨基酸彼分离彻底，从图中清晰看出氨基酸的出峰时间以及峰高，可初步判断出含量最多的氨基酸，也可以单一析某一种氨基酸。这种检测分析方法快捷简单，数据直观可靠，对于发酵液中氨基酸分析有着广阔的应用前景。

【参考文献】：
期刊论文
[1]高产红曲色素和Monacolin K红曲霉菌的诱变选育[J]. 常聪,张安,程述敏,张文学.  中国调味品. 2018(01)
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[10]氨基酸分析仪识别鱼粉中掺入蛋氨酸、赖氨酸原料一例[J]. 李裕,黄勇,欧阳龙,高华,周汝顺,曹峰,李艳平.  湖南饲料. 2016(04)

硕士论文
[1]野生嘟盐菌的分离培养和古紫质蛋白性质研究[D]. 王开彬.浙江大学 2002



本文编号：3325322