银杏黄酮苷的酶法转化研究
发布时间：2021-08-13 08:01
银杏是地球上最古老的珍稀植物之一,黄酮类化合物是银杏叶中重要的活性成分。本论文从贵州传统发酵豆豉食品中分离筛选出两株高产β-葡萄糖苷酶的菌株,利用酶水解转化银杏黄酮苷制备生物活性更高的苷元。通过丙酮沉淀法和反胶束萃取法相结合对粗酶液进行纯化得到电泳纯的β-葡萄糖苷酶;其次,研究了纯化后的β-葡萄糖苷酶的酶学性质,以期为酶的产业化应用奠定基础。最后,通过生物信息学的方法,以银杏黄酮中几种主要的苷类与β-葡萄糖苷酶在活性位点处进行分子对接研究,分析了β-葡萄糖苷酶对银杏黄酮具有高底物选择性的原因及相关蛋白质的功能。首先,以银杏黄酮提取物为唯一碳源,利用栀子苷—谷氨酸钠平板显色法,筛选出两株对银杏黄酮苷具有高酶活力的菌株。随后对两株菌进行了镜检、16S rRNA分子生物学鉴定及生理生化鉴定,鉴定菌株GUXN01为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,菌株GUYZ13为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。其次,采用丙酮沉淀和反胶束萃取相结合的方法分离纯化β-葡萄糖苷酶,得到了丙酮沉淀的最佳工艺参数为:菌株GUYZ13当丙酮与水解液的体积比为1:...
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：118 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
银杏黄酮苷元的基本结构
图 1.2 银杏黄酮苷元的主要类型Figure 1.2 The main types of flavonoid aglycones银杏叶提取物的化学成分繁多，已鉴定的达 160 余种。除了黄酮类物质提取物还含有萜烯内酯，聚异戊二烯醇，烷基酚和银杏酸，以及营养素，糖类，氨基酸，维生素等），此外还有一些有机酸类(谢大年等，199银杏黄酮的成分多种多样，但黄酮和萜类化合物被认为是主要的功能成
图 2.2 复筛菌株产水解银杏黄酮苷的 β-葡萄糖苷酶活力Fig.2.2 Activity of Beta-Glucosidase Producing Hydrolyzed Ginkgo Flavonoid Glycosidesby Double Screening Strain（3）加标回收试验结果加标回收试验结果见表 2.4 所示。由表 2.4 可见，通过加标回收试验得 3 株菌株的加标回收率平均值基本维持在 95%左右，达到了一般加标回收率实验需达到 90%以上的标准（陈银花等，2016）。通过加标回收实验验证了 DNS 法测定 β-葡萄糖苷酶酶活力的准确性。表 2.4 加标回收验证 3,5-二硝基水杨酸法的准确性Table 2.4 Accuracy of the 3,5-dinitrosalicylic acid method菌株加标回收率（%）回收率均值
【参考文献】：
期刊论文
[1]苍术酮潜在靶点预测及正向分子对接验证[J]. 周域,陆建图,张小丁,易增兴,王博龙. 邵阳学院学报(自然科学版). 2019(01)
[2]蘑菇酪氨酸酶抑制剂的合成、生物活性与分子对接研究[J]. 贺海涵,谢珊蓉,贺军波,蔡萌. 化工设计通讯. 2019(01)
[3]几株植物乳杆菌β-葡萄糖苷酶的特性研究[J]. 曾子毅,丁诗瑶,卢向阳,姚慧,王蓉蓉,肖茜,刘成国,周辉. 中国酿造. 2019(01)
[4]UTH1基因破坏提高重组酿酒酵母分泌β-葡萄糖苷酶[J]. 曾钰,熊亮,李洁,DENHAAN Riaan,赵心清,白凤武. 菌物学报. 2018(11)
[5]不同比例螺旋藻多糖与银杏叶提取物对小鼠抗疲劳作用的研究[J]. 于蕾妍,姜忠玲,周颖,李华涛. 中国兽药杂志. 2018(07)
[6]来源于脂环酸芽孢杆菌的GH1家族β-葡萄糖苷酶的葡萄糖耐受性分子改造[J]. 曹慧方,李新新,张玥琦,石鹏君,柏映国,姚斌. 中国农业科技导报. 2018(05)
[7]β-葡萄糖苷酶Bgl2238生物信息学分析[J]. 黄庆,唐乐丽,王晓萌,范新炯,李荷. 基因组学与应用生物学. 2018(04)
[8]毕赤酵母表达的嗜热蓝状菌β-葡萄糖苷酶N-糖基化修饰的作用与功能[J]. 李新新,柏映国,华晨,马锐,石鹏君,罗会颖,姚斌. 微生物学报. 2019(01)
[9]β-葡萄糖苷酶与透明颤菌血红蛋白在大肠杆菌中的共表达[J]. 邓发军,潘宇,常飞,房伟,方泽民,肖亚中. 生物工程学报. 2018(03)
[10]Chinese Medicine Amygdalin and β-Glucosidase Combined with Antibody Enzymatic Prodrug System As A Feasible Antitumor Therapy[J]. LI Yun-long,LI Qiao-xing,LIU Rui-jiang,SHEN Xiang-qian. Chinese Journal of Integrative Medicine. 2018(03)
博士论文
[1]基于多目标差分进化的分子对接算法研究[D]. 徐淑坦.吉林大学 2015
[2]离子液体/有机溶剂混合体系特性及其纤维素溶液纺丝成形研究[D]. 希娜（Hina Saba）.东华大学 2014
[3]基于分子模拟的脂肪酶LipK107结构与功能关系研究及理性设计[D]. 徐涛.华东理工大学 2011
[4]银杏叶总黄酮抗肿瘤药效物质基础与药代动力学研究[D]. 冯小龙.河北医科大学 2009
硕士论文
[1]基于计算机辅助药物设计的组蛋白去乙酰化酶抑制剂的虚拟筛选及其活性验证[D]. 刘婷婷.东北师范大学 2017
[2]海洋黑曲霉固态发酵耐盐纤维素酶的培养条件优化及粗酶制剂的制备[D]. 曲丽丽.浙江大学 2017
[3]二氢卟吩糖苷类化合物的合成及分子对接研究[D]. 田诗德.大连理工大学 2017
[4]基于生物信息学和亲和层析的方法研究栀子苷的药物靶点[D]. 张琦.北京中医药大学 2016
[5]橡胶籽中β-葡萄糖苷酶的热稳定性研究[D]. 胡丹.海南大学 2016
[6]新型氟代PTP1B抑制剂的设计、合成及活性研究[D]. 王保程.中国科学院研究生院(海洋研究所) 2016
[7]β-葡萄糖苷酶基因的筛选及性质分析[D]. 夏玉林.广东药科大学 2016
[8]黄芩—黄连药对与肠道菌群的相互作用研究[D]. 徐君.南京中医药大学 2014
[9]木素过氧化物酶在新型反胶束中的催化特性及稳态动力学研究[D]. 方振敏.湖南大学 2013
[10]定点突变改善海栖热袍菌β-葡萄糖苷酶水解槲皮素糖苷底物专一性的研究[D]. 孙慧慧.南京师范大学 2013
本文编号：3340057
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：118 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
银杏黄酮苷元的基本结构
图 1.2 银杏黄酮苷元的主要类型Figure 1.2 The main types of flavonoid aglycones银杏叶提取物的化学成分繁多，已鉴定的达 160 余种。除了黄酮类物质提取物还含有萜烯内酯，聚异戊二烯醇，烷基酚和银杏酸，以及营养素，糖类，氨基酸，维生素等），此外还有一些有机酸类(谢大年等，199银杏黄酮的成分多种多样，但黄酮和萜类化合物被认为是主要的功能成
图 2.2 复筛菌株产水解银杏黄酮苷的 β-葡萄糖苷酶活力Fig.2.2 Activity of Beta-Glucosidase Producing Hydrolyzed Ginkgo Flavonoid Glycosidesby Double Screening Strain（3）加标回收试验结果加标回收试验结果见表 2.4 所示。由表 2.4 可见，通过加标回收试验得 3 株菌株的加标回收率平均值基本维持在 95%左右，达到了一般加标回收率实验需达到 90%以上的标准（陈银花等，2016）。通过加标回收实验验证了 DNS 法测定 β-葡萄糖苷酶酶活力的准确性。表 2.4 加标回收验证 3,5-二硝基水杨酸法的准确性Table 2.4 Accuracy of the 3,5-dinitrosalicylic acid method菌株加标回收率（%）回收率均值
【参考文献】：
期刊论文
[1]苍术酮潜在靶点预测及正向分子对接验证[J]. 周域,陆建图,张小丁,易增兴,王博龙. 邵阳学院学报(自然科学版). 2019(01)
[2]蘑菇酪氨酸酶抑制剂的合成、生物活性与分子对接研究[J]. 贺海涵,谢珊蓉,贺军波,蔡萌. 化工设计通讯. 2019(01)
[3]几株植物乳杆菌β-葡萄糖苷酶的特性研究[J]. 曾子毅,丁诗瑶,卢向阳,姚慧,王蓉蓉,肖茜,刘成国,周辉. 中国酿造. 2019(01)
[4]UTH1基因破坏提高重组酿酒酵母分泌β-葡萄糖苷酶[J]. 曾钰,熊亮,李洁,DENHAAN Riaan,赵心清,白凤武. 菌物学报. 2018(11)
[5]不同比例螺旋藻多糖与银杏叶提取物对小鼠抗疲劳作用的研究[J]. 于蕾妍,姜忠玲,周颖,李华涛. 中国兽药杂志. 2018(07)
[6]来源于脂环酸芽孢杆菌的GH1家族β-葡萄糖苷酶的葡萄糖耐受性分子改造[J]. 曹慧方,李新新,张玥琦,石鹏君,柏映国,姚斌. 中国农业科技导报. 2018(05)
[7]β-葡萄糖苷酶Bgl2238生物信息学分析[J]. 黄庆,唐乐丽,王晓萌,范新炯,李荷. 基因组学与应用生物学. 2018(04)
[8]毕赤酵母表达的嗜热蓝状菌β-葡萄糖苷酶N-糖基化修饰的作用与功能[J]. 李新新,柏映国,华晨,马锐,石鹏君,罗会颖,姚斌. 微生物学报. 2019(01)
[9]β-葡萄糖苷酶与透明颤菌血红蛋白在大肠杆菌中的共表达[J]. 邓发军,潘宇,常飞,房伟,方泽民,肖亚中. 生物工程学报. 2018(03)
[10]Chinese Medicine Amygdalin and β-Glucosidase Combined with Antibody Enzymatic Prodrug System As A Feasible Antitumor Therapy[J]. LI Yun-long,LI Qiao-xing,LIU Rui-jiang,SHEN Xiang-qian. Chinese Journal of Integrative Medicine. 2018(03)
博士论文
[1]基于多目标差分进化的分子对接算法研究[D]. 徐淑坦.吉林大学 2015
[2]离子液体/有机溶剂混合体系特性及其纤维素溶液纺丝成形研究[D]. 希娜（Hina Saba）.东华大学 2014
[3]基于分子模拟的脂肪酶LipK107结构与功能关系研究及理性设计[D]. 徐涛.华东理工大学 2011
[4]银杏叶总黄酮抗肿瘤药效物质基础与药代动力学研究[D]. 冯小龙.河北医科大学 2009
硕士论文
[1]基于计算机辅助药物设计的组蛋白去乙酰化酶抑制剂的虚拟筛选及其活性验证[D]. 刘婷婷.东北师范大学 2017
[2]海洋黑曲霉固态发酵耐盐纤维素酶的培养条件优化及粗酶制剂的制备[D]. 曲丽丽.浙江大学 2017
[3]二氢卟吩糖苷类化合物的合成及分子对接研究[D]. 田诗德.大连理工大学 2017
[4]基于生物信息学和亲和层析的方法研究栀子苷的药物靶点[D]. 张琦.北京中医药大学 2016
[5]橡胶籽中β-葡萄糖苷酶的热稳定性研究[D]. 胡丹.海南大学 2016
[6]新型氟代PTP1B抑制剂的设计、合成及活性研究[D]. 王保程.中国科学院研究生院(海洋研究所) 2016
[7]β-葡萄糖苷酶基因的筛选及性质分析[D]. 夏玉林.广东药科大学 2016
[8]黄芩—黄连药对与肠道菌群的相互作用研究[D]. 徐君.南京中医药大学 2014
[9]木素过氧化物酶在新型反胶束中的催化特性及稳态动力学研究[D]. 方振敏.湖南大学 2013
[10]定点突变改善海栖热袍菌β-葡萄糖苷酶水解槲皮素糖苷底物专一性的研究[D]. 孙慧慧.南京师范大学 2013
本文编号：3340057
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