毕赤酵母合成S-腺苷甲硫氨酸的代谢工程研究
发布时间：2021-08-19 11:27
S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosyl-L-methionine,SAM）是生物体内一种重要的中间代谢物,可作为药物和保健品,具有广阔的应用前景。本课题组在前期工作中构建了一系列合成SAM的重组毕赤酵母（Pichia pastoris）:DS16（过表达高活性重组SAM合成酶）,G12（弱化DS16中的β-胱硫醚合成酶基因cys4）,G/Dspe（敲除DS16中的S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因spe2）,DS16/DsvA和DS16/DsvP（敲除DS16中的spe2且敲入透明颤菌血红蛋白基因vgb,前者用PAOX调控vgb,后者为PsADH2）。为进一步促进SAM合成,我们以这些重组菌生理特性分析为基础,开展代谢工程研究。在正常摇瓶培养条件下,DS16/DsvA和DS16/DsvP的最大比生长速率和存活率均高于G/Dspe,且SAM体积产量分别提高了 14.3%和4.6%。在低氧摇瓶培养时,DS16/DsvA和DS16/DsvP仍可维持较高存活率,SAM体积产量比G/Dspe提高19.1%和9.6%。在5L罐中控制发酵过程溶氧为10～15%,诱导30 h后DS16/DsvA和DS16/D...
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１?ＳＡＭ的分子结构??Ｆｉ．１．１?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＳＡＭ??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]L-蛋氨酸及甲醇浓度对毕赤酵母摇瓶发酵生产S-腺苷蛋氨酸的影响[J]. 许海琴,倪辉,蔡慧农,杨秋明,伍菱,肖安风. 微生物学杂志. 2012(02)
[2]vgb在红色糖多孢菌表达及生物活性的研究[J]. 吴益民,王洪军,孙艳,王立强,张志强,冯立,杨青. 药物生物技术. 2007(02)
[3]斑贝链霉菌接合转移系统的构建及透明颤菌血红蛋白基因的表达对其次级代谢的影响[J]. 凌华云,闵勇,熊伟,吕和平,喻子牛,郑应华. 微生物学通报. 2006(05)
[4]透明颤菌血红蛋白基因在产黄青霉中的克隆与表达[J]. 李兵,李术娜,周艳芬,赵晓瑜,朱宝成. 中国抗生素杂志. 2006(07)
[5]强化表达SAM合成酶促进SAM在毕赤酵母中累积[J]. 余志良,吴星佳,李东阳,杨晟,周政,蔡谨,袁中一. 生物化学与生物物理学报. 2003(02)
[6]利用重组Pichia pastoris生产腺苷甲硫氨酸[J]. 李东阳,于健,田露,吉鑫松,袁中一. 生物工程学报. 2002(03)
[7]透明颤菌血红蛋白在肉桂地链霉菌中的表达对其细胞生长及抗生素合成的影响[J]. 文莹,宋渊,李季伦. 生物工程学报. 2001(01)
[8]中心组合优化重组毕赤酵母生产S-腺苷甲硫氨酸用发酵培养基[J]. 朱闪,储炬,胡晓清,庄英萍,张嗣良,袁中一. 高技术通讯. 2006 (02)
本文编号：3351326
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１?ＳＡＭ的分子结构??Ｆｉ．１．１?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＳＡＭ??
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第２６页?华东理工大学硕士学位论文????２?０??ｍ?１?＾ａ?￣￣Ｕｎｓｐｅｃｉｆｉｃ?ＳＡＭ?ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ?Ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃ?ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＡＭ?］?＿??Ｉ?ｎｏ：?￡?｜｜??＿＿?ｎ?＿！??ｉ＂：：；?Ｉ?Ｉ?１?１＾１??兰?〇ｔ￣￣■?■?■?＊－Ｊ〇．〇?＞??ＤＳ１６?Ｇ／Ｄｓｐｅ?ＤＳ１６／ＤｓｖＡ?ＤＳ１６／ＤｓｖＰ??图３．２正常条件下四株菌的产量??Ｆｉｇ．３．２?ＳＡＭ?ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｓｔｒａｉｎｓ?ｕｎｄｅｒ?ｏｘｙｇｅｎ?ｎｏｎ－ｌｉｍｉｔｉｎｇ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ??３．２低氧条件下摇瓶发酵??３．２．１菌体生长与存活率??将四株菌接种至含有ＹＰＧ液体培养基的摇瓶中培养两天，然后将此高菌浓的培养液??转移至２５０?ｍＬ摇瓶，装液量为１００?ｍＬ，转速为１３０?ｒｐｍ，以此来限制供氧，并进行诱导??表达和ＳＡＭ合成，考察限氧条件对重组菌特性的影响。如图３．３Ａ所示，在开始诱导的２??天内，菌浓会持续上升，此后随着氧限制加剧，菌体生长受抑制，随着不断补加甲醇和甲??硫氨酸，菌浓有所下降，但插入基因的重组菌仍比另两株菌高。在存活率方面，四株??菌的情况与正常培养条件下相似，依然是ＤＳ１６／ＤｓｖＡ最高为９２％，Ｇ／Ｄｓｐｅ最低为７５％。??Ａ７０［?－＊－ＤＳ１６?＾－ＤＳ１６／Ｄｓｖａ［?Ｂｌ〇〇ｆ＾＝４＝＝＾４?Ｔ—＾１￣Ｔ?Ｔ??—Ｇ／Ｄｓｐｅ」ｖ—ＤＳ１６／ＤｓｖＰ?Ｖ?—２?＾Ｔ？４—▲一＿１??Ｑ?ｓ〇?＾?＾?６Ｑ?．?－＾－Ｇ／Ｄｓｐｅ－＾ＤＳ＾／ＤｓｖＰ??４５?Ｉ?．?ｉ?
【参考文献】：
期刊论文
[1]L-蛋氨酸及甲醇浓度对毕赤酵母摇瓶发酵生产S-腺苷蛋氨酸的影响[J]. 许海琴,倪辉,蔡慧农,杨秋明,伍菱,肖安风. 微生物学杂志. 2012(02)
[2]vgb在红色糖多孢菌表达及生物活性的研究[J]. 吴益民,王洪军,孙艳,王立强,张志强,冯立,杨青. 药物生物技术. 2007(02)
[3]斑贝链霉菌接合转移系统的构建及透明颤菌血红蛋白基因的表达对其次级代谢的影响[J]. 凌华云,闵勇,熊伟,吕和平,喻子牛,郑应华. 微生物学通报. 2006(05)
[4]透明颤菌血红蛋白基因在产黄青霉中的克隆与表达[J]. 李兵,李术娜,周艳芬,赵晓瑜,朱宝成. 中国抗生素杂志. 2006(07)
[5]强化表达SAM合成酶促进SAM在毕赤酵母中累积[J]. 余志良,吴星佳,李东阳,杨晟,周政,蔡谨,袁中一. 生物化学与生物物理学报. 2003(02)
[6]利用重组Pichia pastoris生产腺苷甲硫氨酸[J]. 李东阳,于健,田露,吉鑫松,袁中一. 生物工程学报. 2002(03)
[7]透明颤菌血红蛋白在肉桂地链霉菌中的表达对其细胞生长及抗生素合成的影响[J]. 文莹,宋渊,李季伦. 生物工程学报. 2001(01)
[8]中心组合优化重组毕赤酵母生产S-腺苷甲硫氨酸用发酵培养基[J]. 朱闪,储炬,胡晓清,庄英萍,张嗣良,袁中一. 高技术通讯. 2006 (02)
本文编号：3351326
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