外源基因在产甘油假丝酵母中的表达策略及应用研究
发布时间：2021-08-19 21:19
产甘油假丝酵母（Candida glycerinogenes）作为甘油高效工业化生产菌株,拥有独特的耐高渗透压、耐高温高糖、耐有机酸等抗逆性强特点,是潜在的合成生物学底盘工业微生物。该菌株在遗传与分子生物学方面研究仍有许多空白,阻碍了对其工业应用潜力的开发。酵母作为外源基因表达的重要真核表达系统之一,影响基因表达的因素有很多。本研究从密码子偏好性、启动子、mRNA二级结构等对外源基因在该菌株中表达策略进行研究,旨在为工业抗逆酵母改造、生产高附加值产品提供基础,本论文研究具体如下:为从密码子偏好性优化外源基因表达,研究利用Codon-W分析C.glycerinogenes密码子使用情况,结果发现,C.glycerinogenes平均GC含量为40.3%,GC3s平均含量为37.2%,最优密码子有25个且多以A/U结尾;通过表达不同来源外源基因GFP、ldhA、xylB、xylD、kivD发现:GFP、ldhA密码子偏好与宿主相似,易于成功表达,而xylB、xylD、kivD的GC含量均大于65%,密码子多以G/C结尾,CAI值均约为0.2,ENc值都在40以上,基因只转录不表达,只有在密...
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组表达载体的酶切验证M：DL2503marker；1：pUGAPU-xylB；2：pUGAPU-xylB1；3：pUGAPU-xylD1；
02xylDkivD相对xylB xylB、xylD 和 kivD 密码子优化后的基因转pression levels of xylB、xylD and kivD after因在 C. glycerinogenes 中表达情况1、C.g-kivD、C.g-kivD1 和 C.g-ldhA。在图 3-5 中，外源 ldhA 能够成功的 GFP 在 C. glycerinogenes 中成功表 在 C.glycerinogenes 中只转录不表达C.g-kivD1 分别表达出约 27 kDa、67说明外源基因经过密码子优化，提高 中实现成功表达。由此说明，外源基的转录与表达。Zhou 等[15]发现基因密码子的使用是基因表达的重要决
说明外源基因经过密码子优化，提高基s 中实现成功表达。由此说明，外源基因中的转录与表达。Zhou 等[15]发现基因密明密码子的使用是基因表达的重要决定图 3-5 重组菌中外源基因的 Western Blot 验证白 marker；1：C.g-xylB1；2：C.g-xylB；3：.g-xylD；5：C.g-kivD1；6：C.g-kivD；7：C.stern Blot verification of foreign genes in recomined protein marker; 1: C.g-xylB1; 2: C.g-xylB; 3: C.g-xylD; 5: C.g-kivD1; 6: C.g-kivD; 7: C.g-ld
【参考文献】：
期刊论文
[1]新型渗透压调控的工业酵母启动子[J]. 朱佳莉,诸葛斌,方慧英,宗红,陆信曜,张成,张炜极. 微生物学报. 2015(11)
[2]产甘油假丝酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶基因（CgGPD）功能分析[J]. 陈献忠,方慧英,饶志明,沈微,诸葛斌,王正祥,诸葛健. 微生物学报. 2008(12)
[3]利用荧光蛋白研究产甘油假丝酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶基因CgGPD启动子[J]. 丁春生,饶志明,诸葛斌,沈微,陈献忠,方慧英,诸葛健. 微生物学报. 2008(08)
[4]影响外源基因在巴斯德毕赤酵母表达的因素[J]. 蔡尽忠. 海峡药学. 2006(06)
[5]外源基因表达系统的研究进展[J]. 郭广君,吕素芳,王荣富. 科学技术与工程. 2006(05)
[6]巴斯德毕赤酵母表达系统优化策略[J]. 李洪钊,李亮助,孙强明,冮宏映. 微生物学报. 2003(02)
[7]微生物好氧发酵法生产甘油[J]. 诸葛健,方慧英. 精细与专用化学品. 2001(20)
[8]酵母作为外源基因表达系统的研究进展[J]. 李艳,王正祥,诸葛健. 生物工程进展. 2001(02)
[9]酿酒酵母耐铜基因CUP1的克隆及其植物表达载体的构建[J]. 何勇强,陶勤南,唐纪良,臧宁,小畑仁. 广西农业生物科学. 2000(04)
[10]毕赤酵母的密码子用法分析[J]. 赵翔,霍克克,李育阳. 生物工程学报. 2000(03)
硕士论文
[1]产甘油假丝酵母WL2002-5以18S rDNA为整合位点的表达体系的构建[D]. 徐丹.江南大学 2014
[2]产甘油假丝酵母WL2002-5整合载体的构建研究[D]. 高晓娜.江南大学 2012
本文编号：3352163
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组表达载体的酶切验证M：DL2503marker；1：pUGAPU-xylB；2：pUGAPU-xylB1；3：pUGAPU-xylD1；
02xylDkivD相对xylB xylB、xylD 和 kivD 密码子优化后的基因转pression levels of xylB、xylD and kivD after因在 C. glycerinogenes 中表达情况1、C.g-kivD、C.g-kivD1 和 C.g-ldhA。在图 3-5 中，外源 ldhA 能够成功的 GFP 在 C. glycerinogenes 中成功表 在 C.glycerinogenes 中只转录不表达C.g-kivD1 分别表达出约 27 kDa、67说明外源基因经过密码子优化，提高 中实现成功表达。由此说明，外源基的转录与表达。Zhou 等[15]发现基因密码子的使用是基因表达的重要决
说明外源基因经过密码子优化，提高基s 中实现成功表达。由此说明，外源基因中的转录与表达。Zhou 等[15]发现基因密明密码子的使用是基因表达的重要决定图 3-5 重组菌中外源基因的 Western Blot 验证白 marker；1：C.g-xylB1；2：C.g-xylB；3：.g-xylD；5：C.g-kivD1；6：C.g-kivD；7：C.stern Blot verification of foreign genes in recomined protein marker; 1: C.g-xylB1; 2: C.g-xylB; 3: C.g-xylD; 5: C.g-kivD1; 6: C.g-kivD; 7: C.g-ld
【参考文献】：
期刊论文
[1]新型渗透压调控的工业酵母启动子[J]. 朱佳莉,诸葛斌,方慧英,宗红,陆信曜,张成,张炜极. 微生物学报. 2015(11)
[2]产甘油假丝酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶基因（CgGPD）功能分析[J]. 陈献忠,方慧英,饶志明,沈微,诸葛斌,王正祥,诸葛健. 微生物学报. 2008(12)
[3]利用荧光蛋白研究产甘油假丝酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶基因CgGPD启动子[J]. 丁春生,饶志明,诸葛斌,沈微,陈献忠,方慧英,诸葛健. 微生物学报. 2008(08)
[4]影响外源基因在巴斯德毕赤酵母表达的因素[J]. 蔡尽忠. 海峡药学. 2006(06)
[5]外源基因表达系统的研究进展[J]. 郭广君,吕素芳,王荣富. 科学技术与工程. 2006(05)
[6]巴斯德毕赤酵母表达系统优化策略[J]. 李洪钊,李亮助,孙强明,冮宏映. 微生物学报. 2003(02)
[7]微生物好氧发酵法生产甘油[J]. 诸葛健,方慧英. 精细与专用化学品. 2001(20)
[8]酵母作为外源基因表达系统的研究进展[J]. 李艳,王正祥,诸葛健. 生物工程进展. 2001(02)
[9]酿酒酵母耐铜基因CUP1的克隆及其植物表达载体的构建[J]. 何勇强,陶勤南,唐纪良,臧宁,小畑仁. 广西农业生物科学. 2000(04)
[10]毕赤酵母的密码子用法分析[J]. 赵翔,霍克克,李育阳. 生物工程学报. 2000(03)
硕士论文
[1]产甘油假丝酵母WL2002-5以18S rDNA为整合位点的表达体系的构建[D]. 徐丹.江南大学 2014
[2]产甘油假丝酵母WL2002-5整合载体的构建研究[D]. 高晓娜.江南大学 2012
本文编号：3352163
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/hxgylw/3352163.html
最近更新
教材专著
