不同来源的丝胶蛋白对溃疡性结肠炎口服治疗效果及机制研究

发布时间：2021-09-06 04:38

　　溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）是一种慢性的、非特异性反复发作的肠道疾病,主要发生于大肠。近年来,随着我国人民生活水平的提高,UC发病率逐渐升高,成为世界难治性疾病之一。UC患者通常表现出许多临床症状,如腹痛、腹泻、体重减轻和便血等,严重威胁着公众健康。它被认为是由多种因素（包括遗传因素,饮食、环境和微生物因素等）引起的,其特点是上皮屏障损坏、炎症稳态失衡和活性氧的大量蓄积。因此,UC的完全治愈不仅需要缓解炎症,还需要修复受损的结肠黏膜。到目前为止,UC治疗主要局限于通过使用消炎药或免疫抑制剂来降低炎症程度。尽管这些药物有治疗UC的效果,但它们的进一应用受到限制,因为它们对免疫系统的非特异性作用,导致短期和长期毒副作用,如过敏反应,恶心,肝脏功能指标升高,胰腺炎和其他危及生命的副作用。此外,局部活跃且全身吸收最少的抗炎药物（5-氨基水杨酸）需要频繁的高剂量给药,以发挥可观的临床疗效。因此UC的治疗迫切需要具有粘膜愈合、抗炎和抗氧化作用等特性的新疗法。蚕丝,是熟蚕结茧时分泌丝液凝固而成的连续长纤维,也称“天然丝”。它与羊毛一样,是人类最早利用的动物纤维之一。蚕丝... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

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mg/mL的家蚕丝胶（SS）、柞蚕丝胶（TS）和蓖麻蚕丝胶（CSS）溶液的紫外可见吸收光谱

西南大学硕士学位论文202.4.2家蚕、柞蚕和蓖麻蚕丝胶蛋白的细胞毒性图2-2家蚕丝胶、柞蚕丝胶和蓖麻蚕丝胶的体外细胞毒性实验。Caco2细胞与SS,TS和CSS共孵育24h（a）和48h（b）的细胞毒性实验结果；Raw264.7细胞与SS,TS和CSS共孵育24h（c）和48h（d）的细胞毒性实验结果。Figure2.2InvitrotoxicitytestsofSS,TSandCSSagainstCaco2cellsfor24h(a)and48h(b)andRaw264.7cellsfor24h(c)and48h(d)byMTTassay.Eachpointrepresentsthemean±S.E.M.(n=5).由于结肠上皮细胞和巨噬细胞是与UC治疗相关的两种靶细胞[106]。在以下体外实验中选择了Caco2细胞和Raw264.7细胞。我们通过MTT比色法测试了三种丝胶对Caco2细胞和Raw264.7细胞的体外细胞毒性。首先我们用SS、TS和CSS溶液处理Caco2细胞和Raw264.7细胞和48h，并进一步评估其相应的细胞活力。很明显（图2-2c和d），在三种丝胶与Caco2细胞孵育24h后，所有实验组细胞的存活率都在80%以上（我们一般认为细胞存活率大于80%，药物具很好的生物相容性），表现出良好的细胞相容性。即使三种丝胶与Caco2细胞孵育48h后，我们也没有观察到其对细胞具有明显的毒性。另外，当SS浓度为200μg/mL时，不管三种丝胶与Raw264.7细胞共孵育24h还是48h，SS对Raw264.7细胞（图2-2a和b）杀伤率均小于20%，具有更好的生物安全性，而TS和CSS组对Raw264.7细胞存在明显的细胞毒性。总之：与TS和CSS相比，SS分子在结肠细胞中具有更好的生物相容性。除了细胞毒性研究外，有研究表明，丝胶可以作为哺乳动物细胞培养的无血清培养基的补充，验证了其良好的体外生物相容性[107，108]。

第2章不同来源丝胶蛋白的制备及体外细胞实验212.4.3家蚕、柞蚕和蓖麻蚕丝胶蛋白的细胞摄取情况图2-3（a）用FITC-SS处理不同时间点（0、1、2和4h）后，Caco2细胞对SS的吞噬情况的荧光成像；（b）用FITC-SS、FITC-TS和FITC-CSS分别处理4h后，Caco2细胞对SS、TS和CSS的吞噬情况的荧光成像；（c）FCM吞噬效率直方图反应了SS、TS和CSS分别处理Caco2细胞0、1、2和4h后细胞对药物的吞噬情况；（d）FCM吞噬效率直方图反应了SS、TS和CSS分别处理Caco2细胞0、1、2和4h后细胞对药物的吞噬情况。Figure2.3(a)CellularuptakeprofilesofSSinCaco2cellsaftertreatmentwithFITC-SSfor0,1,2,and4h,respectively;(b)CellularuptakeprofilesofSS,TSandCSSinCaco2cellsaftertreatmentwithFITC-SS,FITC-TSandFITC-CSSfor4h,respectively;Afterincubation,cellswereprocessedforfluorescencestaining.FixedcellswerestainedwithDAPIforvisualizationofnuclei(blue),Rhodamineconjugatedphalloidinforvisualizationofcytoskeleton,andFITCconjugatedSS,TSandCSSwereobservedinFITCchannel.Scalebarrepresents20μm.(c)FCManalysisand(d)MFIofCaco2cellsaftertreatmentwithFITC-SS,FITC-TSandFITC-CSSfor4h,respectively.Scalebarrepresents20μm.Eachpointrepresentsthemean±SEM(n=3).为了考察丝胶是否可以被Caco2细胞和Raw264.7细胞有效吞噬，我们首先使用CLSM通过可视化方式观察了三种丝胶被细胞的摄取情况。用含FITC-SS的

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
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本文编号：3386763