超离心筛选皮状丝孢酵母油脂积累的分子生物学机制解析及其遗传操作

发布时间：2021-10-05 07:20

　　微生物细胞内积累的油脂是合成生物柴油与生物航煤的重要原料,油脂酵母以木质纤维素为原料进行油脂发酵为油脂生产提供了一条重要路径。皮状丝孢酵母（Trichosporon cutaneum）是一种典型的油脂酵母,具有优异的木质纤维素体系适应性。本实验室利用高含油率酵母菌株的细胞密度更低的简单原理,在木质纤维素水解液中对T cutaneum ACCC 20271进行了基于离心筛选的长期适应性进化,通过逐步增加离心力筛选到了油脂生产能力显著增强的突变菌株TTcutaneum MS28,其油脂产量较原始菌株提高了2.41倍。另外,通过降低发酵液体系的粘度与密度以极尽离心筛选强度,获得了油脂产量进一步提升的突变菌株TTcutaneum WL97。两株高产油脂酵母菌株与原始菌株相比,其细胞含油率大幅提高,可更快地利用木质纤维素体系中全部单糖进行油脂发酵,同时细胞壁显著变薄、细胞体积增大。本研究主要利用qRT-PCR方法,对产生这些变化的分子生物学机制进行解析。研究发现,高产油脂酵母细胞内与油脂生产所需前体物质（乙酰-CoA、NADPH）以及中间产物（脂肪酸）合成相关的部分基因发生了几十倍的上调表达差异... 

【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．８木质纤维素全糖代谢相关基因ｑ－ＲＴＰＣＲ实验结果（ａ，葡萄糖；ｂ，木糖；ｃ，阿拉伯糖；ｄ，半??乳糖；ｅ，甘露糖）??Ｆｉｇ?２．８?Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｅｓ?ｒｅｓｐｏｎｓｉ?

在含有梯度浓度潮霉素的ＹＰＤ液体培养基中培养７：?ＭＳ２８与工程菌株７：??ｃ逾皿ｒ歷ＭＳ２８?ＡＥＣＴＺ／ｚ／ｉＴＴ？，如图３．５所不，工程菌株相对于Ｚ?ｃ威麗臓ＭＳ２８对潮霉??素的敏感性显著减弱，超过１２００?ｐｇ／ｍＬ的潮霉素才可对其生长产生较大程度的抑制作??用。??

【参考文献】：
期刊论文
[1]高效液相色谱法测定酵母葡聚糖[J]. 陈少峰,望忠福.  食品科技. 2009(07)
[2]利用脂肪酸合成酶抑制剂和磷酸香草醛反应筛选高产油脂酵母菌[J]. 李仁民,王菊芳,马爽,严亚平,李文建.  微生物学通报. 2008(04)
[3]提高酵母菌原生质体制备与再生的方法研究[J]. 王明兹,施巧琴,周晓兰,吴松刚.  微生物学杂志. 2005(03)

博士论文
[1]同源重组技术在酿酒酵母表达载体构建中的应用[D]. 陈向岭.复旦大学 2005



本文编号：3419260