海洋来源芽孢杆菌SCSIO06063产蛋白酶发酵及其制备活性肽的研究
发布时间：2021-10-13 14:51
目的:通过酶解将海洋软体动物蛋白转化为功能肽是提高其利用效率的有效途径。但由于海洋软体动物蛋白结构庞大复杂,多以糖蛋白形式存在,水解位点被糖基侧链屏蔽,难以在温和条件下水解成功能域结构完整的功能肽。实验室前期针对此共性问题对产酶海洋微生物开展筛选和研究。发现了海洋来源的芽孢杆菌SCSIO 06063发酵所产的胞外蛋白酶在温和条件下酶解扇贝蛋白,产物具有显著抗氧化性,表现了良好的应用潜力。本研究在此基础上,对SCSIO 06063的产酶发酵进行优化,探索规模化制备SCSIO 06063蛋白酶的最优条件,并且深入研究其催化酶解扇贝蛋白的产物,明确其中抗氧化有效成分,为形成完整的新酶应用技术奠定基础。方法:1、发酵条件的优化:以蛋白酶活为检测目标,优化海洋芽孢杆菌SCSIO 06063产蛋白酶的培养条件。利用单因素法,在LB培养基的基础上,优化碳源、氮源、金属离子和盐度。考察温度、初始PH、接种量、转速对发酵产酶的影响。采用响应面法对影响产酶的主要因素进行优化,并在最佳优化条件下制备酶溶液和扇贝酶解液。2、扇贝SCSIO 06063酶解液中抗氧化肽的研究:以DPPH及OH自由基清除率评价抗氧...
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１．蛋白酶酶活测定标准曲线??
２．３．１标准曲线的绘制??不同浓度的酪氨酸溶液经稀释后，对稀释液按蛋白酶酶活测定方法进行类似??处理，并测定吸光值，得到如下蛋白酶酶活标准曲线。结果见图２－１。??０．４５?１??〇４?－?ｙ＝０．Ｏ０Ｓ８ｘ＋Ｏ．Ｏ３Ｍ＞??Ｒ２＝０Ｓ９９＞＾??ａ?０．３ｊ??〇?０．２５??０２＇??０．１５?－＊??０．１??〇－＾５??〇?１?；?！?＇?；?；?ｉ??０?２０?４０?６０?８０?１００?１２０?Ｕｇ／ｍｌ??图２－１．蛋白酶酶活测定标准曲线??本实验设置了不同梯度浓度（０、２０、４０、６０、８０、１００ｕｇ／ｍｌ）酪氨酸溶液，??测定不同浓度的酪氨酸溶液与吸光度之间的标准曲线。用以计算酶解酪蛋白产生??的酪氨酸含量，进而计算酶溶液的酶活力。??２．３．２碳源对菌株ＳＣＳＩ?００６０６３产＿活力的影响??１：?Ｉ??５?，〇＝：?＿??１幽圓＿＿＿??甘露醇麦芽耱果糖?茛糖?甘油葡萄耱??图２－２．不同碳源对产蛋白酶活力的影响??８??
但由于微生物的种类特点不同，导致不同微生物所适合的碳源也不相同。＇实??验考察了在基础培养基中分别添加甘露醇、麦芽糖、果糖、蔗糖、甘油、葡萄糖??后发酵液酶活的变化。结果如图２－２所示，加入麦芽糖后，相对酶活达到最高，??为?１９６％。??２．?３．?３氮源对菌株ＳＣＳ丨００６０６３产酶的影响??２５０－１??Ｉ：?■??Ｂ：ｌ?＿?Ｉ?議??ＨＨＳＣ１?酵母紛?尿麦甘ｉ？酸??图２－３．不同氮源对产蛋白酶活力的影响??氮源对微生物生长代谢有重要的影响，构成代谢产物的组成部分，如酶，氨??基酸等活性物质。由图２－３可知菌株ＳＣＳＩ００６０６３在以尿素作为氮源时蛋白酶相??对酶活最高，为２０８．５％，其次是甘氨酸，而在以ＮＨＣＵ、酵母粉为氮源时的酶??活力比较低，因此在几种常见氮源中，选择尿素作为发酵培养基的氮源是最合适??的。??９??
【参考文献】：
期刊论文
[1]响应面优化虾夷扇贝抗氧化肽酶解液工艺研究[J]. 梁晓芳,牟建楼,严超,宋春华,尹斯雅,刘建达. 食品研究与开发. 2017(20)
[2]海洋贝类活性肽研究进展[J]. 蔡康鹏,蔡水淋,吴靖娜,苏捷,刘智禹,肖美添. 渔业研究. 2016(02)
[3]海湾扇贝多肽提取工艺优化及其结构鉴定[J]. 刘媛,王健,牟建楼,孙剑峰,魏巍,王颉. 中国食品学报. 2015(08)
[4]碱性蛋白酶水解扇贝边条件的优化[J]. 张超,唐志红,赵振军,秦松. 食品科技. 2015(01)
[5]我国海洋贝类资源的利用现状和发展趋势[J]. 刘媛,王健,孙剑峰,王颉. 现代食品科技. 2013(03)
[6]一株高产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及发酵条件的优化[J]. 崔洪霞,李春林,钱龙,孙滢,周艳艳,史云柯. 燕山大学学报. 2013(01)
[7]海湾扇贝营养成分分析及评价[J]. 李伟青,王颉,孙剑锋,李伟硕. 营养学报. 2011(06)
[8]中国海洋微生物多样性研究[J]. 张偲,张长生,田新朋,王发左. 中国科学院院刊. 2010(06)
[9]蛋白酶生产和应用的进展[J]. 胡学智,王俊. 工业微生物. 2008(04)
[10]海洋生物活性提取物在化妆品中的应用[J]. 任舒文,管华诗. 中国海洋药物. 2007(02)
硕士论文
[1]栉孔扇贝裙边酶解物美拉德反应产物特性研究[D]. 孙世广.大连工业大学 2016
[2]菠萝蛋白酶酶解海湾扇贝裙边制备抗氧化肽的研究[D]. 李荣乔.河北农业大学 2014
本文编号：3434887
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１．蛋白酶酶活测定标准曲线??
２．３．１标准曲线的绘制??不同浓度的酪氨酸溶液经稀释后，对稀释液按蛋白酶酶活测定方法进行类似??处理，并测定吸光值，得到如下蛋白酶酶活标准曲线。结果见图２－１。??０．４５?１??〇４?－?ｙ＝０．Ｏ０Ｓ８ｘ＋Ｏ．Ｏ３Ｍ＞??Ｒ２＝０Ｓ９９＞＾??ａ?０．３ｊ??〇?０．２５??０２＇??０．１５?－＊??０．１??〇－＾５??〇?１?；?！?＇?；?；?ｉ??０?２０?４０?６０?８０?１００?１２０?Ｕｇ／ｍｌ??图２－１．蛋白酶酶活测定标准曲线??本实验设置了不同梯度浓度（０、２０、４０、６０、８０、１００ｕｇ／ｍｌ）酪氨酸溶液，??测定不同浓度的酪氨酸溶液与吸光度之间的标准曲线。用以计算酶解酪蛋白产生??的酪氨酸含量，进而计算酶溶液的酶活力。??２．３．２碳源对菌株ＳＣＳＩ?００６０６３产＿活力的影响??１：?Ｉ??５?，〇＝：?＿??１幽圓＿＿＿??甘露醇麦芽耱果糖?茛糖?甘油葡萄耱??图２－２．不同碳源对产蛋白酶活力的影响??８??
但由于微生物的种类特点不同，导致不同微生物所适合的碳源也不相同。＇实??验考察了在基础培养基中分别添加甘露醇、麦芽糖、果糖、蔗糖、甘油、葡萄糖??后发酵液酶活的变化。结果如图２－２所示，加入麦芽糖后，相对酶活达到最高，??为?１９６％。??２．?３．?３氮源对菌株ＳＣＳ丨００６０６３产酶的影响??２５０－１??Ｉ：?■??Ｂ：ｌ?＿?Ｉ?議??ＨＨＳＣ１?酵母紛?尿麦甘ｉ？酸??图２－３．不同氮源对产蛋白酶活力的影响??氮源对微生物生长代谢有重要的影响，构成代谢产物的组成部分，如酶，氨??基酸等活性物质。由图２－３可知菌株ＳＣＳＩ００６０６３在以尿素作为氮源时蛋白酶相??对酶活最高，为２０８．５％，其次是甘氨酸，而在以ＮＨＣＵ、酵母粉为氮源时的酶??活力比较低，因此在几种常见氮源中，选择尿素作为发酵培养基的氮源是最合适??的。??９??
【参考文献】：
期刊论文
[1]响应面优化虾夷扇贝抗氧化肽酶解液工艺研究[J]. 梁晓芳,牟建楼,严超,宋春华,尹斯雅,刘建达. 食品研究与开发. 2017(20)
[2]海洋贝类活性肽研究进展[J]. 蔡康鹏,蔡水淋,吴靖娜,苏捷,刘智禹,肖美添. 渔业研究. 2016(02)
[3]海湾扇贝多肽提取工艺优化及其结构鉴定[J]. 刘媛,王健,牟建楼,孙剑峰,魏巍,王颉. 中国食品学报. 2015(08)
[4]碱性蛋白酶水解扇贝边条件的优化[J]. 张超,唐志红,赵振军,秦松. 食品科技. 2015(01)
[5]我国海洋贝类资源的利用现状和发展趋势[J]. 刘媛,王健,孙剑峰,王颉. 现代食品科技. 2013(03)
[6]一株高产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及发酵条件的优化[J]. 崔洪霞,李春林,钱龙,孙滢,周艳艳,史云柯. 燕山大学学报. 2013(01)
[7]海湾扇贝营养成分分析及评价[J]. 李伟青,王颉,孙剑锋,李伟硕. 营养学报. 2011(06)
[8]中国海洋微生物多样性研究[J]. 张偲,张长生,田新朋,王发左. 中国科学院院刊. 2010(06)
[9]蛋白酶生产和应用的进展[J]. 胡学智,王俊. 工业微生物. 2008(04)
[10]海洋生物活性提取物在化妆品中的应用[J]. 任舒文,管华诗. 中国海洋药物. 2007(02)
硕士论文
[1]栉孔扇贝裙边酶解物美拉德反应产物特性研究[D]. 孙世广.大连工业大学 2016
[2]菠萝蛋白酶酶解海湾扇贝裙边制备抗氧化肽的研究[D]. 李荣乔.河北农业大学 2014
本文编号：3434887
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