虫草花多糖的提取及其对CCl 4 诱导的小鼠肝纤维化的作用与机制研究

发布时间：2021-10-18 07:37

　　肝纤维化（liver fibrosis）是由病毒性肝炎、胆汁淤积、非酒精性脂肪肝炎等慢性肝脏疾病过程中细胞外基质的过度积累导致的,晚期肝纤维化会导致肝硬化、肝衰竭、门静脉高压等疾病,严重威胁患者生命健康。肝纤维化病理机制复杂,目前尚无疗效明确的药物可供临床应用。天然产物能通过多靶点治疗肝纤维化,已成为近年来防治肝纤维化研究的热点。人工培养基培养的蛹虫草称为虫草花。蛹虫草多糖具有抗氧化、降血糖、抗病毒等生物活性,相比蛹虫草,虫草花价格低廉,且多糖含量更高,因此可能具有更高的利用价值。本文以虫草花为原料,探究其最佳提取工艺,并通过体内研究探究其对小鼠肝纤维化的作用与机制。本研究通过水提醇沉法提取粗多糖,利用响应面分析法优化多糖提取工艺,通过Sevag法除蛋白,得到纯度为95.61%的虫草花多糖;以C57BL/6J小鼠为研究对象,采用四氯化碳（CCl₄）诱导肝纤维化动物模型,给予虫草花多糖喂食,实验结束后提取小鼠血清和肝脏组织研究虫草花多糖对肝纤维化的作用及机制。通过本课题的完成,可以得到以下结论:（1）选取提取温度、液料比、提取时间三个因素,在单因素实验的基础上,通过... 

【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 肝纤维化的现状
    1.2 肝纤维化的形成及发展
    1.3 肝纤维化发展过程中的细胞类型及作用
        1.3.1 肝星状细胞
        1.3.2 肝实质细胞
        1.3.3 肝血窦内皮细胞
        1.3.4 枯否细胞
        1.3.5 自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞
        1.3.6 中性粒细胞
        1.3.7 T淋巴细胞
        1.3.8 B淋巴细胞
    1.4 肝纤维化过程中的细胞因子及信号通路
        1.4.1 核因子κB/瘤坏死因子α
        1.4.2 过氧化物酶体增殖物激活受体γ
        1.4.3 B淋巴细胞瘤-2/BAX信号通路
        1.4.4 胶原蛋白家族
        1.4.5 TGF-β1/Smad信号通路
    1.5 天然产物对肝纤维化的作用及机制
        1.5.1 抑制肝损伤
        1.5.2 抑制炎症
        1.5.3 调控HSCs
            1.5.3.1 抑制HSCs活化
            1.5.3.2 抑制HSCs增殖
            1.5.3.3 促进HSCs凋亡
    1.6 冬虫夏草、蛹虫草与虫草花
    1.7 选题依据
第二章 实验材料及方法
    2.1 虫草花多糖提取工艺优化及提纯
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 实验方法
            2.1.4.1 虫草花粗多糖的提取工艺
            2.1.4.2 多糖得率测定
            2.1.4.3 水提虫草花多糖单因素实验
            2.1.4.4 响应面法优化虫草花多糖提取条件
            2.1.4.5 数据处理
    2.2 虫草花粗多糖提纯
        2.2.1 虫草花多糖总糖含量的测定
        2.2.2 总蛋白含量的测定
    2.3 虫草花多糖抑制肝纤维化的体内、外实验
        2.3.1 实验动物
        2.3.2 实验试剂
        2.3.3 实验耗材
        2.3.4 实验仪器
        2.3.5 细胞相关实验方法
            2.3.5.1 细胞复苏
            2.3.5.2 细胞培养及传代
            2.3.5.3 细胞冻存
            2.3.5.4 MTT法测虫草花多糖的细胞毒性
            2.3.5.5 实验动物的给药处理
            2.3.5.6 小鼠血清样本提取及分析
            2.3.5.7 小鼠肝脏组织获取
            2.3.5.8 小鼠肝脏石蜡切片制作
            2.3.5.9 H&E染色
            2.3.5.10 天狼星红染色
            2.3.5.11 蛋白质免疫印迹(Western Blot)实验
            2.3.5.12 实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q-PCR)
            2.3.5.13 数据分析
第三章 实验结果
    3.1 虫草花多糖提取工艺优化及粗多糖纯化
        3.1.1 虫草花多糖得率单因素实验
            3.1.1.1 提取温度对虫草花多糖得率的影响
            3.1.1.2 液料比对虫草花多糖得率的影响
            3.1.1.3 提取时间对虫草花多糖得率的影响
        3.1.2 响应面法优化虫草花多糖提取实验结果
            3.1.2.1 回归方差分析
            3.1.2.2 响应面分析
            3.1.2.3 虫草花多糖提取工艺优化
            3.1.2.4 验证虫草花多糖提取最佳工艺
        3.1.3 虫草花多糖提纯结果
    3.2 虫草花多糖对于人源肝细胞LO2无显著细胞毒性
    3.3 虫草花多糖抑制CCl_4诱导的小鼠肝纤维化
        3.3.1 虫草花多糖对CCl_4诱导的肝纤维化小鼠症状的影响
        3.3.2 虫草花多糖改善肝纤维化小鼠体征
        3.3.3 虫草花多糖降低小鼠肝纤维化水平
        3.3.4 虫草花多糖通过抑制炎症改善小鼠肝纤维化
        3.3.5 虫草花多糖通过BCL-2/BAX信号通路抑制小鼠肝纤维化
第四章 讨论与结论
    4.1 结果讨论
    4.2 实验结论
    4.3 展望
参考文献
攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况



本文编号：3442483