重组L-天冬酰胺酶发酵、提取及稳定化研究
发布时间:2021-11-17 07:20
L-天冬酰胺酶(L-Asparaginase,EC 3.5.1.1,L-ASNase)是一种水解酶,能够将L-天冬酰胺脱去氨基生成L-天冬氨酸和氨。该酶具有抗肿瘤活性,在食品和医药等领域应用十分广泛。本研究以一株能够分泌L-ASNase的重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis/ASNΔ25/B2为生产菌株,对重组L-ASNase发酵、提取和稳定化进行研究。主要研究结果如下:(1)摇瓶发酵优化提高重组L-ASNase产量采用单因素实验考察了培养条件对菌体生长和产酶的影响,初始pH影响较大,最适初始pH为7.5。然后使用神经网络算法对其发酵培养基进行优化。首先通过单因素实验和Plackett-Burman实验筛选显著因素,再进行中心组合实验建立实验数据样本,最后利用JMP10.0建立神经网络模型优化发酵培养基组成。经优化,获得最佳培养基组成如下:蔗糖65 g·L-1、酵母蛋白胨28 g·L-1、玉米浆11 g·L-1、KH2PO4 11.5 g·L-1
【文章来源】:江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】:57 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
L-ASNase催化机制Fig.1-1ThecatalyticmechanismofL-ASNase
oC;进样体积:10 μL。发酵液 12000 r·min-1离心 10 min 后,取适量上清液液用 0.22 μm 滤膜过滤。最后将该样品检测出的峰出发酵液中蔗糖浓度。称取 0.75 g 蔗糖标准样品,用超纯水溶解定容至 25分别稀释至不同浓度的蔗糖标准溶液,用 HPLC 测品浓度(g·L-1)为纵坐标,绘制蔗糖标准曲线并得的计算[60, 61]比速率计算等使用 Origin 软件处理。胶电泳分析 30 μL 样品和 10 μL Loading buffer,混匀后 70℃处加入适量 20×mops 缓冲液,加入蛋白质分子量标准 1 h。具体操作参考说明书。发酵液
第三章 结果与讨论第三章 结果与讨论平重组 B. subtilis 产 L-天冬酰胺酶发酵优化B. subtilis 培养条件优化生长曲线的确定于不同的生长阶段,其生理活性差异较大。选择不同时期的种子,接种后也较大。如果种子过嫩,将会导致迟滞期延长。而如果种子过老,则可能降。处于对数生长期的种子,生长迅速,活力较高,接种后能很快适应新tilis/ASNΔ25/B2 的种子生长曲线如图 3-1 所示,6~10 h 为对数生长期。因~10 h 的种子进行接种发酵培养。
【参考文献】:
期刊论文
[1]基于神经网络对枯草芽孢杆菌富硒过程的建模研究[J]. 周梦舟,吴珊,柳念,汪超,徐宁,胡勇,史文博,李冬生. 中国食品学报. 2016(12)
[2]水处理絮凝剂的研究现状[J]. 杨博,孙宾宾. 合成材料老化与应用. 2016(05)
[3]耐有机溶剂α-葡萄糖苷酶的补料分批发酵研究[J]. 唐群芳,李江华,刘龙,堵国成,陈坚. 食品与生物技术学报. 2016(01)
[4]两阶段搅拌转速控制策略发酵生产柠檬酸[J]. 李佳伟,刘龙,李江华,堵国成,陈坚,孙福新. 食品与生物技术学报. 2014(02)
[5]有机氮源对谷氨酸棒杆菌发酵L-缬氨酸的影响[J]. 徐庆阳,孙家凯,吴晓娇,王晶,谢希贤,陈宁. 食品与发酵工业. 2012(05)
[6]黑曲霉DL-116高温乳糖酶复合热稳定剂的研究[J]. 李宁,赵珊,于宏伟,郭润芳,贾英民. 食品科技. 2010(06)
[7]絮凝剂产生菌的筛选及其絮凝活性的测定[J]. 杨耿,阮红,罗晶. 浙江大学学报(理学版). 2008(02)
[8]一些蛋白质和多肽对谷氨酰胺转胺酶热稳定性的影响[J]. 荣绍丰,高红亮,常忠义,柏俊华,瞿伟菁. 食品工业科技. 2006(12)
[9]溶氧对L-天冬酰胺酶发酵的影响及其控制[J]. 刘红,蔡绍皙,潘红春. 中国生物制品学杂志. 2003(06)
硕士论文
[1]海洋黑曲霉固态发酵耐盐纤维素酶的培养条件优化及粗酶制剂的制备[D]. 曲丽丽.浙江大学 2017
[2]枯草芽孢杆菌L-天冬酰胺酶的分子改造及发酵优化[D]. 龙水清.江南大学 2016
[3]L-天冬酰胺酶在Bacillus subtilis WB600中的表达与发酵过程优化研究[D]. 陈璇.江南大学 2015
[4]Bacillus subtilis B11-06 L-天冬酰胺酶的表达、发酵优化及酶学性质研究[D]. 贾明媚.江南大学 2014
[5]链霉菌发酵液固液分离过程研究[D]. 王侠.河北科技大学 2011
[6]高温乳糖酶高产菌株发酵条件优化及酶制剂的研究[D]. 赵珊.河北农业大学 2008
[7]重组枯草芽孢杆菌生产角质酶发酵条件优化[D]. 张芙华.江南大学 2008
[8]发酵液中1,3-丙二醇的分离提取工艺的研究[D]. 鲁诗锋.大连理工大学 2006
本文编号:3500446
【文章来源】:江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】:57 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
L-ASNase催化机制Fig.1-1ThecatalyticmechanismofL-ASNase
oC;进样体积:10 μL。发酵液 12000 r·min-1离心 10 min 后,取适量上清液液用 0.22 μm 滤膜过滤。最后将该样品检测出的峰出发酵液中蔗糖浓度。称取 0.75 g 蔗糖标准样品,用超纯水溶解定容至 25分别稀释至不同浓度的蔗糖标准溶液,用 HPLC 测品浓度(g·L-1)为纵坐标,绘制蔗糖标准曲线并得的计算[60, 61]比速率计算等使用 Origin 软件处理。胶电泳分析 30 μL 样品和 10 μL Loading buffer,混匀后 70℃处加入适量 20×mops 缓冲液,加入蛋白质分子量标准 1 h。具体操作参考说明书。发酵液
第三章 结果与讨论第三章 结果与讨论平重组 B. subtilis 产 L-天冬酰胺酶发酵优化B. subtilis 培养条件优化生长曲线的确定于不同的生长阶段,其生理活性差异较大。选择不同时期的种子,接种后也较大。如果种子过嫩,将会导致迟滞期延长。而如果种子过老,则可能降。处于对数生长期的种子,生长迅速,活力较高,接种后能很快适应新tilis/ASNΔ25/B2 的种子生长曲线如图 3-1 所示,6~10 h 为对数生长期。因~10 h 的种子进行接种发酵培养。
【参考文献】:
期刊论文
[1]基于神经网络对枯草芽孢杆菌富硒过程的建模研究[J]. 周梦舟,吴珊,柳念,汪超,徐宁,胡勇,史文博,李冬生. 中国食品学报. 2016(12)
[2]水处理絮凝剂的研究现状[J]. 杨博,孙宾宾. 合成材料老化与应用. 2016(05)
[3]耐有机溶剂α-葡萄糖苷酶的补料分批发酵研究[J]. 唐群芳,李江华,刘龙,堵国成,陈坚. 食品与生物技术学报. 2016(01)
[4]两阶段搅拌转速控制策略发酵生产柠檬酸[J]. 李佳伟,刘龙,李江华,堵国成,陈坚,孙福新. 食品与生物技术学报. 2014(02)
[5]有机氮源对谷氨酸棒杆菌发酵L-缬氨酸的影响[J]. 徐庆阳,孙家凯,吴晓娇,王晶,谢希贤,陈宁. 食品与发酵工业. 2012(05)
[6]黑曲霉DL-116高温乳糖酶复合热稳定剂的研究[J]. 李宁,赵珊,于宏伟,郭润芳,贾英民. 食品科技. 2010(06)
[7]絮凝剂产生菌的筛选及其絮凝活性的测定[J]. 杨耿,阮红,罗晶. 浙江大学学报(理学版). 2008(02)
[8]一些蛋白质和多肽对谷氨酰胺转胺酶热稳定性的影响[J]. 荣绍丰,高红亮,常忠义,柏俊华,瞿伟菁. 食品工业科技. 2006(12)
[9]溶氧对L-天冬酰胺酶发酵的影响及其控制[J]. 刘红,蔡绍皙,潘红春. 中国生物制品学杂志. 2003(06)
硕士论文
[1]海洋黑曲霉固态发酵耐盐纤维素酶的培养条件优化及粗酶制剂的制备[D]. 曲丽丽.浙江大学 2017
[2]枯草芽孢杆菌L-天冬酰胺酶的分子改造及发酵优化[D]. 龙水清.江南大学 2016
[3]L-天冬酰胺酶在Bacillus subtilis WB600中的表达与发酵过程优化研究[D]. 陈璇.江南大学 2015
[4]Bacillus subtilis B11-06 L-天冬酰胺酶的表达、发酵优化及酶学性质研究[D]. 贾明媚.江南大学 2014
[5]链霉菌发酵液固液分离过程研究[D]. 王侠.河北科技大学 2011
[6]高温乳糖酶高产菌株发酵条件优化及酶制剂的研究[D]. 赵珊.河北农业大学 2008
[7]重组枯草芽孢杆菌生产角质酶发酵条件优化[D]. 张芙华.江南大学 2008
[8]发酵液中1,3-丙二醇的分离提取工艺的研究[D]. 鲁诗锋.大连理工大学 2006
本文编号:3500446
本文链接:https://www.wllwen.com/projectlw/hxgylw/3500446.html
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