聚乙二醇化重组人干扰素α2b的制备工艺及质量研究

发布时间：2021-11-17 06:07

　　重组人干扰素α2b（rh IFNα2b）是最早运用基因工程技术实现量产的细胞因子之一,临床上主要用于急慢性病毒性肝炎（乙型、丙型等）、尖锐湿疣、白血病、淋巴瘤、艾滋病相关性卡波济氏肉瘤、恶性黑色素瘤等的治疗。但因其用药间隔短,很多研究人员致力于开发长效干扰素制剂,聚乙二醇修饰技术是解决蛋白质药物半衰期短的有效手段之一。本学位论文采用分子量20KD的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯（m PEG-Succinimidyl Carbonate,m PEG-SC）对rh IFNα2b进行修饰,开发了能够获取高纯度聚乙二醇化重组人干扰素α2b（PEG-rh IFNα2b）的制备方法,并对所获产品进行了理化性质、生物学活性、稳定性等质量研究。（1）聚乙二醇化重组人干扰素α2b（PEG-rh IFNα2b）的制备和纯化。采用DOE试验设计,优化p H、投料比、rh IFNα2b浓度等参数,确定PEG-rh IFNα2b的制备工艺;以离子交换层析结合凝胶过滤层析纯化目标物。最优的工艺为:修饰反应在p H7.0、温度2～8℃、时间约4小时、rh IFNα2b浓度为1.8mg/ml～2.7mg/ml、投料... 

【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PEG-rhIFNα2b含量与rhIFNα2b浓度、投料比的等值线图

第二章聚乙二醇化重组人干扰素α2b制备工艺研究21PEG-rhIFNα2b含量与rhIFNα2b浓度、pH的等值线图见图2.2所示。图2.2PEG-rhIFNα2b含量与rhIFNα2b浓度、pH的等值线图Fig2.2IsogramofPEGrhIFNα2bcontent,rhIFNα2bconcentrationandpHPEG-rhIFNα2b含量与pH、投料比的等值线图见图2.3所示。图2.3PEG-rhIFNα2b含量与pH、投料比的等值线图Fig2.3IsogramofPEGrhIFNα2bcontent,pHandfeedratioPEG-rhIFNα2b含量主效应图见图2.4所示。

合肥工业大学硕士学位论文26能够被去除，收集的洗脱产物中主要为PEG-IFNα2b，还有少量PEG-IFNα2b寡聚体和极少量未被修饰的IFNα2b。目标蛋白再经超滤浓缩后经凝胶过滤能获得满意的纯化效果，聚乙二醇化重组人干扰素α2b纯度在95%以上。详见图2.10、图2.11、图2.12、图2.13.图2.10聚乙二醇化重组人干扰素α2b(2017001Y)SP层析图谱Fig2.10SPchromatogramofPEG-rhIFNα2b(2017001Y)由2.10可知，在洗脱液流量达到700、780和890mL时，出现3个明显的蛋白吸收峰。收集出现吸收峰的3段洗脱液，浓缩后进行SephacrylS-300凝胶过滤层析，层析图谱见图2.11。


本文编号：3500351