门冬酰胺酶生产菌种复壮及5000L规模发酵工艺优化研究
发布时间：2021-12-16 17:20
本论文针对门冬酰胺酶生产菌小规模生产过程中不稳定的问题,对欧文氏菌进行复壮筛选,并对放大至5000 L罐规模的系列问题进行研究和探索,实现门冬酰胺酶发酵工艺的优化。研究结果如下:1、通过紫外线+LiCl复合诱变法复壮筛选出3株产酶能力强、性状稳定的欧文氏菌突变株,其中产酶能力最强的FZ-1-15号菌株摇瓶发酵门冬酰胺酶的效价为34.9IU/mL,比出发菌株提高了 56.5%。2、通过碳源、氮源、复合氮源和无机盐等单因素试验、Plackett-Burman和响应面分析法优化研究,得出最佳发酵培养基配方:胰蛋白胨2.2%+谷氨酸钠2.1%+玉米浆2%+酵母粉0.5%+NaC10.5%,pH7.0;培养基灭菌方式采用121℃、30min湿消。通过三角瓶改良和摇瓶发酵培养试验,确定了一级生产种子培养的关键工艺控制参数:培养温度为37 ℃,1000mL摇瓶的培养基装量为250 mL,接种量为1.5%,摇床转速为220 r/min,培养周期为18 h。试验证明剪切力对发酵有显著的负面影响,在工艺控制中应通过调控通风量和罐压力等手段减少剪切力的影响因素。3、在50 L智能发酵罐上进行了复壮菌株FZ-...
【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１紫外线诱变剂量与欧文氏菌存活率曲线??Ｆｉｕｒｅ?２－１?ＵＶ?ｍｕｔａｅｎｉｃ?ｄｏｓｅ?ａｎｄ?Ｅｒｗｉｎｉａ?ｖｉａｂｉｌｉｔｃｕｒｖｅ??
??第二章门冬酰胺酶生产菌种复壮及发酵工艺的优化?２．?３．?１．２复壮菌株的生长与产率??按照２．２．３．６的方法１）对保藏的欧文氏菌出发菌株（编号：ＯＺ２８－３）进行紫外线射复壮试验（按上一步骤选定的紫外线照射时间为ｌ〇５ｓ），先挑取１００个较大的菌落，用门冬酰胺酶酶活快速测定方法进行显色反应，从中选出２０株显色反应中呈深棕红的突变株进行复筛，筛选出３株酶效价较高的菌株（分别编号为：ＦＺ－１－０８，?ＦＺ－１－１５，??ＦＺ－１－１７）。诱变筛选出的３株菌株与出发菌株（ＯＺ２８－３）进行摇瓶培养，测定培养液??的效价和〇Ｄ５〇〇。结果如图２－２所示。??
?试验结果得出，１０００?ｍＬ改良三角瓶摇瓶发酵门冬酰胺酶的效价达３９．４３?ＩＵ／ｍＬ，??比５００ｍＬ普通三角瓶提高了?１２．０２％。从图２－４可看出，经过特制加工改良后的三角瓶??发酵培养门冬酰胺酶的效价明显提高，这可能是改良后１０００ｍＬ三角瓶的内凹形挡板起??到了类似搅拌桨的作用所致，在摇床震荡过程中阻止培养基形成漩涡，击打培养液形成??了许多小气泡，增加了摇瓶培养基的溶氧率。??２．?３．?３发酵培养基优化??２．?３．?３．?１不同碳源对复壮菌株ＦＺ－１－１５产酶的影响??发酵基础培养基中以４％的胰蛋白胨为氮源，加入葡萄糖、可溶性淀粉、蔗糖和甘??油等碳源，按２．２．３．８的方法１）进行不同碳源的１〇〇〇?ｍＬ摇瓶发酵培养试验，测定培养??液的〇Ｄ５（Ｋ）、效价和ｐＨ值。每个实验做３个平行
【参考文献】：
期刊论文
[1]门冬酰胺酶治疗急性淋巴细胞白血病应用现状[J]. 史沛杰,方建培. 中国实用儿科杂志. 2016(04)
[2]培门冬酶治疗儿童急性淋巴细胞白血病的临床观察[J]. 闫红,胡宛如,张乾忠,董国凤,何莉. 中国实用儿科杂志. 2015(05)
[3]两种菌种来源的左旋门冬酰胺酶抗白血病作用与机制比较[J]. 王开美,徐宏贵,郭海霞,金少文,罗湘琴,方建培. 中国实验血液学杂志. 2014(03)
[4]培门冬酶治疗儿童白血病研究进展[J]. 刘丽,谢晓恬. 中国当代儿科杂志. 2014(02)
[5]聚乙二醇修饰门冬酰胺酶的研究进展[J]. 庞梦婷,连治国,吴彦卓,徐明波,姚文兵. 药物生物技术. 2013(06)
[6]不同来源门冬酰胺酶在儿童急性淋巴细胞白血病应用的对照研究[J]. 刘维,郭海霞,徐宏贵,高琴丽,黄科,周敦华,方建培. 中国小儿血液与肿瘤杂志. 2013(02)
[7]响应面法优化蛹虫草深层培养产菌丝及虫草素的发酵工艺[J]. 蔡水淋,郑永标,王明兹,林清强,黄杨,黄建忠. 农产品加工(学刊). 2013(06)
[8]不同类型左旋门冬酰胺酶的特点及临床应用[J]. 罗学群. 中国小儿血液与肿瘤杂志. 2013(01)
[9]两种不同剂型门冬酰胺酶治疗急性淋巴细胞白血病的不良反应比较及其对策[J]. 王亚,卢愿,孙立荣. 实用儿科临床杂志. 2012(15)
[10]左旋门冬酰胺酶杀伤MOLT-4细胞的机制研究[J]. 庄倩,郝良纯,张继红. 中国肿瘤临床. 2012(08)
硕士论文
[1]肺念菌素B0的发酵工艺研究[D]. 郑玲辉.浙江大学 2014
本文编号：3538521
【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１紫外线诱变剂量与欧文氏菌存活率曲线??Ｆｉｕｒｅ?２－１?ＵＶ?ｍｕｔａｅｎｉｃ?ｄｏｓｅ?ａｎｄ?Ｅｒｗｉｎｉａ?ｖｉａｂｉｌｉｔｃｕｒｖｅ??
??第二章门冬酰胺酶生产菌种复壮及发酵工艺的优化?２．?３．?１．２复壮菌株的生长与产率??按照２．２．３．６的方法１）对保藏的欧文氏菌出发菌株（编号：ＯＺ２８－３）进行紫外线射复壮试验（按上一步骤选定的紫外线照射时间为ｌ〇５ｓ），先挑取１００个较大的菌落，用门冬酰胺酶酶活快速测定方法进行显色反应，从中选出２０株显色反应中呈深棕红的突变株进行复筛，筛选出３株酶效价较高的菌株（分别编号为：ＦＺ－１－０８，?ＦＺ－１－１５，??ＦＺ－１－１７）。诱变筛选出的３株菌株与出发菌株（ＯＺ２８－３）进行摇瓶培养，测定培养液??的效价和〇Ｄ５〇〇。结果如图２－２所示。??
?试验结果得出，１０００?ｍＬ改良三角瓶摇瓶发酵门冬酰胺酶的效价达３９．４３?ＩＵ／ｍＬ，??比５００ｍＬ普通三角瓶提高了?１２．０２％。从图２－４可看出，经过特制加工改良后的三角瓶??发酵培养门冬酰胺酶的效价明显提高，这可能是改良后１０００ｍＬ三角瓶的内凹形挡板起??到了类似搅拌桨的作用所致，在摇床震荡过程中阻止培养基形成漩涡，击打培养液形成??了许多小气泡，增加了摇瓶培养基的溶氧率。??２．?３．?３发酵培养基优化??２．?３．?３．?１不同碳源对复壮菌株ＦＺ－１－１５产酶的影响??发酵基础培养基中以４％的胰蛋白胨为氮源，加入葡萄糖、可溶性淀粉、蔗糖和甘??油等碳源，按２．２．３．８的方法１）进行不同碳源的１〇〇〇?ｍＬ摇瓶发酵培养试验，测定培养??液的〇Ｄ５（Ｋ）、效价和ｐＨ值。每个实验做３个平行
【参考文献】：
期刊论文
[1]门冬酰胺酶治疗急性淋巴细胞白血病应用现状[J]. 史沛杰,方建培. 中国实用儿科杂志. 2016(04)
[2]培门冬酶治疗儿童急性淋巴细胞白血病的临床观察[J]. 闫红,胡宛如,张乾忠,董国凤,何莉. 中国实用儿科杂志. 2015(05)
[3]两种菌种来源的左旋门冬酰胺酶抗白血病作用与机制比较[J]. 王开美,徐宏贵,郭海霞,金少文,罗湘琴,方建培. 中国实验血液学杂志. 2014(03)
[4]培门冬酶治疗儿童白血病研究进展[J]. 刘丽,谢晓恬. 中国当代儿科杂志. 2014(02)
[5]聚乙二醇修饰门冬酰胺酶的研究进展[J]. 庞梦婷,连治国,吴彦卓,徐明波,姚文兵. 药物生物技术. 2013(06)
[6]不同来源门冬酰胺酶在儿童急性淋巴细胞白血病应用的对照研究[J]. 刘维,郭海霞,徐宏贵,高琴丽,黄科,周敦华,方建培. 中国小儿血液与肿瘤杂志. 2013(02)
[7]响应面法优化蛹虫草深层培养产菌丝及虫草素的发酵工艺[J]. 蔡水淋,郑永标,王明兹,林清强,黄杨,黄建忠. 农产品加工(学刊). 2013(06)
[8]不同类型左旋门冬酰胺酶的特点及临床应用[J]. 罗学群. 中国小儿血液与肿瘤杂志. 2013(01)
[9]两种不同剂型门冬酰胺酶治疗急性淋巴细胞白血病的不良反应比较及其对策[J]. 王亚,卢愿,孙立荣. 实用儿科临床杂志. 2012(15)
[10]左旋门冬酰胺酶杀伤MOLT-4细胞的机制研究[J]. 庄倩,郝良纯,张继红. 中国肿瘤临床. 2012(08)
硕士论文
[1]肺念菌素B0的发酵工艺研究[D]. 郑玲辉.浙江大学 2014
本文编号：3538521
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