林蛙骨肉小肽的制备与结构鉴定及其对RAW264.7细胞的免疫调节作用
发布时间：2022-01-20 03:28
林蛙又称雪蛤,盛产于中国东北长白山地区。林蛙具有非常高的药用价值和营养价值,这使得它成为经济蛙中最具有经济价值的一种。林蛙骨肉中含有丰富的蛋白质,是良好的蛋白质来源。本研究以林蛙骨肉为原材料,首先通过酶法进行林蛙骨肉多肽的制备,以水解度和多肽得率为主要指标,确定林蛙骨肉多肽制备的工艺条件,然后将最佳条件下制备的林蛙骨肉多肽通过超滤、凝胶层析等技术进行分离纯化。将凝胶层析得到的五个组分分别收集、筛选,再用高分辨液质联用仪进行结构鉴定,筛选出优势氨基酸序列。最后将经过分离纯化得到的林蛙骨肉小肽进行免疫调节作用的研究。主要研究结果如下:1.将预处理过的林蛙骨肉为原料,以水解度为指标,分别用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶在其最适条件下对林蛙骨肉进行蛋白酶解试验,结果发现木瓜蛋白酶酶解效果好于其他蛋白酶,其中木瓜蛋白酶水解度为18.31±0.25%。2.利用单因素试验考查了pH、温度、酶解时间、加酶量（E/S）对林蛙骨肉水解度和多肽得率的影响,并以水解度为指标进行了正交实验,确定了木瓜蛋白酶酶解林蛙骨肉的最佳工艺条件为:pH为7,温度55℃,酶解时间4h,加酶量为6%,在...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
工艺路线图
第2章林蛙骨肉多肽提取工艺研究152.4结果与讨论2.4.1林蛙骨肉基本成分测定结果林蛙骨肉中蛋白质含量为54.65±0.24%、脂肪含量为2.81±0.04%、钙含量为4.04±0.05%。脱钙率为62.35±0.18%，脱脂率为44.68%±0.22%。2.4.2酶活力测定结果标准曲线的绘制：在波长为680nm下检测吸光值，以酪氨酸的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制标准曲线，如图所示，其中y=0.0104x-0.0025，R2=0.9995图2-1标准曲线Figure2-1Standardcurve根据酶活力的测定方法，结合标曲可以得到试验结果如表2-5，可知本试验中木瓜蛋白酶的酶活力高于其他蛋白酶的酶活力，可为后续林蛙骨肉水解蛋白酶的选择作参考。表2-5酶活力测定结果Table2-5DeterminationofEnzymeActivity蛋白酶酶活力（U/mg）胰蛋白酶230中性蛋白酶270碱性蛋白酶320木瓜蛋白酶490胃蛋白酶190
吉林大学硕士学位论文162.4.3蛋白酶的选择在制备林蛙骨肉多肽时，酶的选择是关键，不同的水解酶由于其理化性质的差异，切割位点不同所得到的产物也会不同，其功能特性也就不同。本试验选用五种蛋白酶分别水解林蛙骨肉，以水解度为指标，考察选择最适蛋白酶，蛋白酶水解结果如图2-2所示，木瓜蛋白酶水解度明显优于其他蛋白酶，水解度为18.31±0.25%。结果分析得木瓜蛋白酶为水解林蛙骨肉最佳蛋白酶眩图2-2不同蛋白酶对水解度的影响Figure2-2Effectofdifferentproteasesonthedegreeofhydrolysis2.4.4蛋白酶水解林蛙骨肉的单因素试验结果影响酶促反应的因素非常多，而且复杂，这里我们选择了几个常见且影响较大的因素进行分析，分别为：pH值、温度、时间、加酶量，结果如下。2.4.4.1不同pH对提取林蛙骨肉多肽的影响图2-2不同pH对水解度和多肽得率的影响Fig.2-2EffectofdifferentpHondegreeofhydrolysisandpeptideyield
【参考文献】：
期刊论文
[1]绿球藻多糖分离纯化及抗氧化活性研究[J]. 李旭东,孙彦峰,冯佳,吕俊平,刘琪,南芳茹,刘旭东,谢树莲. 食品研究与开发. 2020(05)
[2]羊肚菌抗氧化肽的制备、纯化和鉴定[J]. 范三红,田雨. 山西农业科学. 2020(01)
[3]酶解海带蛋白制备抗菌肽的工艺优化[J]. 吴承燕,苏羽航,王艳君,刘冬梅,王靖. 食品工业. 2020(01)
[4]东北林蛙和牛蛙腿部肌肉的基本营养成分分析[J]. 田新民,石兰英. 湖北农业科学. 2019(21)
[5]菠萝蜜低聚肽的免疫调节作用研究[J]. 郝云涛,珠娜,刘欣然,毛瑞雪,刘睿,康家伟,乌兰,胡佳妮,李勇. 食品工业科技. 2020(07)
[6]生物活性肽抗癌活性及其作用机制研究进展[J]. 李宁,石爱民,刘红芝,刘丽,胡晖,王强. 中国食品学报. 2019(11)
[7]水龙骨多糖成分及免疫调节活性的初步研究[J]. 王重娟,梁月琴,夏洪颖,李翠红,朱瑜丹,李仲昆. 免疫学杂志. 2019(09)
[8]小分子阿胶肽的免疫调节作用[J]. 梁荣,樊琛,李燕,曾庆华,刘冉,郭兴峰. 食品工业科技. 2019(22)
[9]反相高效液相色谱与离子交换色谱测定牛肉中肌肽含量的对比研究[J]. 戴璐瑶,朱仙娜,陈玉燕,张一斐,郭姣,陈梅兰. 药物分析杂志. 2019(05)
[10]林蛙油的营养保健功能及其产品研究进展[J]. 方妍,贾雪巍,翁丽丽,董金香. 亚太传统医药. 2018(09)
博士论文
[1]绿豆肽对小鼠巨噬细胞免疫活性的影响及其作用机制[D]. 刁静静.黑龙江八一农垦大学 2019
[2]小麦胚芽蛋白的免疫活性评价及球蛋白免疫活性肽的结构鉴定与机理研究[D]. 武文佳.华南理工大学 2017
[3]高效液相色谱及联用技术分离分析蔗糖衍生物及结构表征[D]. 晏文武.浙江大学 2017
[4]菜籽蛋白源肾素和ACE双重抑制肽的制备及其抑制机制研究[D]. 何荣.江南大学 2013
[5]海参胶原蛋白生化性质及胶原肽活性研究[D]. 崔凤霞.中国海洋大学 2007
硕士论文
[1]蛴螬多肽的提取纯化及其免疫调节作用的研究[D]. 李可.北京农学院 2019
[2]林蛙胶原蛋白多肽的分离纯化、功能性研究及其微胶囊的制备[D]. 赵静.吉林大学 2019
[3]阿里红多糖对RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用机制的初步研究[D]. 木尼萨·迪力夏提.新疆医科大学 2019
[4]儿童暴发性心肌炎细胞因子水平变化及其临床特征[D]. 贾晓怡.浙江大学 2019
[5]冻融所致蛋白质交联对豆腐体外消化及质构特性的影响[D]. 刘铭.南昌大学 2016
[6]粟米蛋白发酵制备活性肽及粟米糠油生物学功能研究[D]. 何曙剑.合肥工业大学 2016
[7]复合微生物发酵豆粕的研制及对母猪生产性能影响的研究[D]. 樊春光.河南农业大学 2013
[8]蛋清源ACE抑制肽的结构鉴定及稳定性研究[D]. 于志鹏.吉林大学 2011
[9]林蛙残体胶原蛋白提取工艺的研究[D]. 黄巧莉.哈尔滨商业大学 2010
[10]林蛙油小分子肽的制备及其分子量分布研究[D]. 孙建忠.吉林农业大学 2008
本文编号：3598088
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
工艺路线图
第2章林蛙骨肉多肽提取工艺研究152.4结果与讨论2.4.1林蛙骨肉基本成分测定结果林蛙骨肉中蛋白质含量为54.65±0.24%、脂肪含量为2.81±0.04%、钙含量为4.04±0.05%。脱钙率为62.35±0.18%，脱脂率为44.68%±0.22%。2.4.2酶活力测定结果标准曲线的绘制：在波长为680nm下检测吸光值，以酪氨酸的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制标准曲线，如图所示，其中y=0.0104x-0.0025，R2=0.9995图2-1标准曲线Figure2-1Standardcurve根据酶活力的测定方法，结合标曲可以得到试验结果如表2-5，可知本试验中木瓜蛋白酶的酶活力高于其他蛋白酶的酶活力，可为后续林蛙骨肉水解蛋白酶的选择作参考。表2-5酶活力测定结果Table2-5DeterminationofEnzymeActivity蛋白酶酶活力（U/mg）胰蛋白酶230中性蛋白酶270碱性蛋白酶320木瓜蛋白酶490胃蛋白酶190
吉林大学硕士学位论文162.4.3蛋白酶的选择在制备林蛙骨肉多肽时，酶的选择是关键，不同的水解酶由于其理化性质的差异，切割位点不同所得到的产物也会不同，其功能特性也就不同。本试验选用五种蛋白酶分别水解林蛙骨肉，以水解度为指标，考察选择最适蛋白酶，蛋白酶水解结果如图2-2所示，木瓜蛋白酶水解度明显优于其他蛋白酶，水解度为18.31±0.25%。结果分析得木瓜蛋白酶为水解林蛙骨肉最佳蛋白酶眩图2-2不同蛋白酶对水解度的影响Figure2-2Effectofdifferentproteasesonthedegreeofhydrolysis2.4.4蛋白酶水解林蛙骨肉的单因素试验结果影响酶促反应的因素非常多，而且复杂，这里我们选择了几个常见且影响较大的因素进行分析，分别为：pH值、温度、时间、加酶量，结果如下。2.4.4.1不同pH对提取林蛙骨肉多肽的影响图2-2不同pH对水解度和多肽得率的影响Fig.2-2EffectofdifferentpHondegreeofhydrolysisandpeptideyield
【参考文献】：
期刊论文
[1]绿球藻多糖分离纯化及抗氧化活性研究[J]. 李旭东,孙彦峰,冯佳,吕俊平,刘琪,南芳茹,刘旭东,谢树莲. 食品研究与开发. 2020(05)
[2]羊肚菌抗氧化肽的制备、纯化和鉴定[J]. 范三红,田雨. 山西农业科学. 2020(01)
[3]酶解海带蛋白制备抗菌肽的工艺优化[J]. 吴承燕,苏羽航,王艳君,刘冬梅,王靖. 食品工业. 2020(01)
[4]东北林蛙和牛蛙腿部肌肉的基本营养成分分析[J]. 田新民,石兰英. 湖北农业科学. 2019(21)
[5]菠萝蜜低聚肽的免疫调节作用研究[J]. 郝云涛,珠娜,刘欣然,毛瑞雪,刘睿,康家伟,乌兰,胡佳妮,李勇. 食品工业科技. 2020(07)
[6]生物活性肽抗癌活性及其作用机制研究进展[J]. 李宁,石爱民,刘红芝,刘丽,胡晖,王强. 中国食品学报. 2019(11)
[7]水龙骨多糖成分及免疫调节活性的初步研究[J]. 王重娟,梁月琴,夏洪颖,李翠红,朱瑜丹,李仲昆. 免疫学杂志. 2019(09)
[8]小分子阿胶肽的免疫调节作用[J]. 梁荣,樊琛,李燕,曾庆华,刘冉,郭兴峰. 食品工业科技. 2019(22)
[9]反相高效液相色谱与离子交换色谱测定牛肉中肌肽含量的对比研究[J]. 戴璐瑶,朱仙娜,陈玉燕,张一斐,郭姣,陈梅兰. 药物分析杂志. 2019(05)
[10]林蛙油的营养保健功能及其产品研究进展[J]. 方妍,贾雪巍,翁丽丽,董金香. 亚太传统医药. 2018(09)
博士论文
[1]绿豆肽对小鼠巨噬细胞免疫活性的影响及其作用机制[D]. 刁静静.黑龙江八一农垦大学 2019
[2]小麦胚芽蛋白的免疫活性评价及球蛋白免疫活性肽的结构鉴定与机理研究[D]. 武文佳.华南理工大学 2017
[3]高效液相色谱及联用技术分离分析蔗糖衍生物及结构表征[D]. 晏文武.浙江大学 2017
[4]菜籽蛋白源肾素和ACE双重抑制肽的制备及其抑制机制研究[D]. 何荣.江南大学 2013
[5]海参胶原蛋白生化性质及胶原肽活性研究[D]. 崔凤霞.中国海洋大学 2007
硕士论文
[1]蛴螬多肽的提取纯化及其免疫调节作用的研究[D]. 李可.北京农学院 2019
[2]林蛙胶原蛋白多肽的分离纯化、功能性研究及其微胶囊的制备[D]. 赵静.吉林大学 2019
[3]阿里红多糖对RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用机制的初步研究[D]. 木尼萨·迪力夏提.新疆医科大学 2019
[4]儿童暴发性心肌炎细胞因子水平变化及其临床特征[D]. 贾晓怡.浙江大学 2019
[5]冻融所致蛋白质交联对豆腐体外消化及质构特性的影响[D]. 刘铭.南昌大学 2016
[6]粟米蛋白发酵制备活性肽及粟米糠油生物学功能研究[D]. 何曙剑.合肥工业大学 2016
[7]复合微生物发酵豆粕的研制及对母猪生产性能影响的研究[D]. 樊春光.河南农业大学 2013
[8]蛋清源ACE抑制肽的结构鉴定及稳定性研究[D]. 于志鹏.吉林大学 2011
[9]林蛙残体胶原蛋白提取工艺的研究[D]. 黄巧莉.哈尔滨商业大学 2010
[10]林蛙油小分子肽的制备及其分子量分布研究[D]. 孙建忠.吉林农业大学 2008
本文编号：3598088
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