人Cu,Zn-SOD大肠杆菌与酿酒酵母工程菌的构建和发酵条件的优化

发布时间：2022-02-10 08:04

　　通过基因工程技术生产人Cu,Zn-SOD具有产量高,活性稳定,纯度高的优点,且避免了Cu,Zn-SOD异源蛋白排斥的免疫性过敏反应,解决了从血液中提取Cu,Zn-SOD的排异问题。对Cu,Zn-SOD的工业生产和在医疗、生化品及食品中的应用具有重大的意义。本研究旨在利用基因工程的方法,构建人Cu,Zn-SOD的原核表达工程菌和真核表达工程菌,分别优化其发酵条件以提高表达量和酶活性,并对两种表达工程菌进行比对和分析,以利于后续的研究和生产。本研究根据大肠杆菌密码子偏好性对人Cu,Zn-SOD的核苷酸序列改造并人工合成,将其与质粒pET-22b（+）结合构建表达载体,转化入大肠杆菌BL21（DE3）中,以IPTG诱导实现分泌表达,并进一步对其发酵条件进行优化以提高表达量和蛋白活性。根据酿酒酵母密码子偏好性对人Cu,Zn-SOD的核苷酸序列改造并人工合成,将其与质粒pAUR123结合构建表达载体,转化入酿酒酵母中,并进一步对其发酵条件进行优化以提高表达量和蛋白活性。通过运用工程菌的优势密码子对外源目的基因进行改造,提高工程菌异源表达量,充分发挥各自的优势,挖掘大肠杆菌和酿酒酵母作为异源表达工... 

【文章来源】：吉林大学吉林省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：102 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

技术路线

Cu,Zn-SOD活性中心结构

图 1.2 人 Cu, Zn-SOD 三级结构Cu, Zn-SOD 的活性中心像一个椭圆形口袋的形状，铜离子位于口水分子和 4 个组氨酸形成配位，靠近溶剂面，参与酶的催化反应，天冬氨酸和三个组氨酸配位，包埋于疏水基团中，维持和稳定酶的

【参考文献】：
期刊论文
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[3]微生物发酵提高SOD产率的研究进展[J]. 时桂芹,周文珊,任菲.  中国生物工程杂志. 2017(04)
[4]长春花密码子使用偏好性分析[J]. 李滢,匡雪君,朱孝轩,朱英杰,孙超.  中国中药杂志. 2016(22)
[5]高效hCu,Zn-SOD-PTD融合蛋白的表达及其穿膜功能的研究[J]. 王晓勋,杞少华,李瑞明,梁清乐.  分子诊断与治疗杂志. 2016(02)
[6]人参DS和D12H基因的异源共表达[J]. 王雪松,李躬军,赵寿经,安岩,曲庆玲,卢超.  吉林大学学报(工学版). 2016(04)
[7]重组人铜锌超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的表达研究[J]. 王岚,刘新,张帆,肖纯凌.  沈阳医学院学报. 2015(02)
[8]人Cu,Zn-SOD在重组毕赤酵母中表达的发酵工艺研究[J]. 郑屹峰,孙金钰,巫启明,郭建辉,林春通,刘树滔,饶平凡.  福州大学学报(自然科学版). 2014(05)
[9]pET 22b-TP17表达载体的构建与鉴定[J]. 李佳凌,李尹凤,汤军,蔡延森.  泸州医学院学报. 2014(03)
[10]氧化自由基清除剂超氧化物歧化酶与疾病[J]. 张笑天,郑晓瑛.  中国公共卫生. 2014(10)

博士论文
[1]重组PTD-Cu/Zn SOD的构建及其对心肌损伤的保护作用研究[D]. 刘菊英.武汉大学 2013

硕士论文
[1]人Cu，Zn-SOD工程酶在毕赤酵母中的表达研究[D]. 杜姗姗.吉林大学 2006



本文编号：3618545