短梗霉筛

发布时间：2022-07-19 15:39

　　聚苹果酸（Poly malic acid,PMLA）是以苹果酸为单体通过酯键连接形成的高分子聚合物。聚苹果酸独特的性质结构赋予其在生物医药领域、食品领域、化妆品领域广泛的应用前景。通过生物发酵法生产聚苹果酸全部为β型,其单体全部为L-苹果酸,应用范围更广,更加适合用于制作各种生物材料。短梗霉（Aureobasidium spp.）是主要的聚苹果酸产生菌,本文从自然界中分离筛选短梗霉菌株,应用分子生物学方法对菌株进行鉴定,构建系统发育进化树。对出芽短梗霉ipe-1菌株发酵生产聚苹果酸的主要代谢途径进行研究。本论文的主要研究结果如下:（1）经亚甲基蓝培养基初筛共获得18株野生菌落,经摇瓶复筛,获得产聚苹果酸的菌株2株,分别命名为ipe-3、ipe-5。经分子生物学鉴定,ipe-3为出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）,ipe-5为短梗霉。并将ipe-3、ipe-5的ITS序列提交到GenBank。ipe-5为首次发现的短梗霉新菌种,与GenBank数据库中ITS序列同源性为96%。（2）对ipe-3、ipe-5菌株进行了发酵性能测定,ipe-3聚苹果酸产量为10.0... 

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 出芽短梗霉概述
    1.2 聚苹果酸
        1.2.1 聚苹果酸概述
        1.2.2 聚苹果酸的合成方法
        1.2.3 出芽短梗霉合成聚苹果酸的研究现状
    1.3 短梗霉合成聚苹果酸的代谢途径
        1.3.1 Aureobasidium spp.合成β-PMLA的代谢途径
        1.3.2 Aureobasidium spp.合成β-PMLA的关键酶系及基因
    1.4 Aureobasidium spp.合成β-PMLA的代谢调控
        1.4.1 溶氧、pH及氧化还原电位的影响
        1.4.2 代谢抑制物及中间体的调控
    1.5 课题的研究意义与研究内容
        1.5.1 课题的研究意义
        1.5.2 课题的研究内容
第2章 短梗霉菌种的分离筛选研究
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验菌种及样品
        2.2.2 实验试剂
        2.2.3 实验仪器
        2.2.4 培养基
    2.3 实验方法
        2.3.1 菌种的筛选及培养
        2.3.2 菌种的鉴定
        2.3.3 菌体浓度的测定
        2.3.4 PMLA浓度的测定
        2.3.5 葡萄糖浓度的测定
        2.3.6 细胞粒径的测定
        2.3.7 溶氧(DO)浓度的测定
        2.3.8 pH的测定
        2.3.9 发酵参数计算
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 苹果酸检测条件的建立
        2.4.2 短梗霉菌株的筛选鉴定
        2.4.3 基于ITS序列分析的系统发育树的构建
        2.4.4 发酵性能的比较
        2.4.5 形态学观察
    2.5 本章小结
第3章 溶氧及丙酮酸对聚苹果酸产量的影响
    3.1 引言
    3.2 实验仪器和材料
        3.2.1 实验菌种
        3.2.2 实验试剂
        3.2.3 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 培养基
        3.3.2 培养方法
        3.3.3 分析方法
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 溶氧对ipe-3发酵的影响
        3.4.2 溶氧对ipe-5发酵的影响
        3.4.3 溶氧对ipe-1发酵的影响
        3.4.4 溶氧对聚苹果酸合成关键酶活的影响
        3.4.5 丙酮酸对ipe-1发酵的影响
        3.4.6 72h补糖对ipe-1发酵的影响
    3.5 本章小结
第4章 NaF、三氟乙酸、ATP对聚苹果酸发酵的影响
    4.1 引言
    4.2 实验仪器和材料
        4.2.1 实验菌种
        4.2.2 实验试剂
        4.2.3 实验仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 培养基
        4.3.2 培养方法
        4.3.3 分析方法
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 NaF对ipe-1发酵的影响
        4.4.2 三氟乙酸对ipe-1发酵的影响
        4.4.3 ATP对ipe-1发酵的影响
        4.4.4 三氟乙酸与ATP对发酵的共同影响
    4.5 本章小结
第5章 总结与展望
    5.1 总结
    5.2 展望
参考文献
致谢
在学期间主要科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]微生物发酵过程中溶氧的影响及其调控[J]. 赵宇,陈忠敏.  食品与发酵科技. 2016(04)
[2]基于代谢工程策略合成L-苹果酸研究进展[J]. 周丽,崔文璟,刘中美,周哲敏.  食品工业科技. 2015(10)
[3]聚苹果酸聚合途径中苹果酰辅酶A连接酶基因的克隆、表达及酶学性质[J]. 吴小燕,周峰,涂光伟,邹祥.  微生物学报. 2014(08)
[4]出芽短梗霉发酵生产聚苹果酸的代谢通量及关键酶活性分析[J]. 乔长晟,郑志达,孟迪,宋玉民,盖丽丰.  现代食品科技. 2014(07)
[5]出芽短梗霉积累聚苹果酸途径及调控研究[J]. 程若东,王浩,周华,程媛媛,何若平,韦萍.  化工学报. 2012(11)
[6]出芽短梗霉发酵生产聚苹果酸的研究[J]. 靳挺,武玉学,陈真,赵龙煜.  中国食品学报. 2012(10)
[7]响应面法优化短梗霉多糖培养条件[J]. 崔玉海,童群义.  食品与发酵工业. 2008(03)

硕士论文
[1]聚苹果酸的合成研究[D]. 余文兵.南京工业大学 2005



本文编号：3663688