两性离子多肽修饰的GLP-1衍生物的制备及其生物活性研究

发布时间：2022-12-18 04:44

　　胰高血糖素样肽-1（GLP-1）作为治疗Ⅱ型糖尿病的重要靶点之一,相对传统药物,具有不易引起低血糖等优点。但由于天然GLP-1体内循环时间短,使用受限。因此,GLP-1长效受体激动剂的开发已成为国内外研究热点。现有修饰GLP-1的合成聚合物（如PEG、PLGA）,虽然可以有效改善GLP-1的药动学与药效学,但这些聚合物的长期使用容易引发不良的免疫原性反应。两性离子多肽具有优秀的抗蛋白质非特异性吸附（nonfouling）功能,独特的体内酶降解能力和正常代谢的优势。为了实现GLP-1类似物更加平稳的体内缓释,优秀的血液循环能力,提高药效和生物利用度,避免不良的免疫原性反应,本工作设计了聚谷氨酸-赖氨酸两性离子多肽（poly（EK））修饰的GLP-1衍生物（poly（EK）-Lira）,并对其结构特征、体外活性、体内药效、药代动力学及免疫原性等进行考察。本文主要包括以下几个部分:（1）以Nα-（δ-苄基-L-谷氨酰）-Nε-苄氧羰基-L-赖氨酸为单体,以HOBt和EDC·HCl为缩合剂,以N-叔丁氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸为封端剂,进行聚合后脱保护,得到半胱氨酸封端的两性离子多肽（... 

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【学位级别】：硕士

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致谢
摘要
Abstract
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第1章 文献综述
    1.1 引言
    1.2 GLP-1与Ⅱ型糖尿病
        1.2.1 II型糖尿病概述
        1.2.2 GLP-1及其生理学作用
        1.2.3 GLP-1受体激动剂的发展
        1.2.4 利拉鲁肽概述
    1.3 两性离子多肽及其应用
        1.3.1 两性离子多肽概述
        1.3.2 抗蛋白质非特异性吸附及其机理
        1.3.3 两性离子多肽的应用
    1.4 本课题的提出及主要工作
第2章 两性离子多肽poly(EK)修饰的GLP-1衍生物的制备与表征
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验仪器设备
        2.2.3 poly(EK)的合成
            2.2.3.1 EK dimer (with boc)的合成
            2.2.3.2 EK dimer (without boc)的合成
            2.2.3.3 poly(EK)的合成
        2.2.4 Lira-MA的合成
        2.2.5 poly(EK)-Lira和PEG-Lira的合成
        2.2.6 Cy5.5-poly(EK)-Lira的合成
        2.2.7 表征及性能分析
            2.2.7.1 核磁共振谱仪(~1H NMR)
            2.2.7.2 凝胶渗透色谱仪GPC
            2.2.7.3 poly(EK)与Lira-MA反应效率测定
            2.2.7.4 动态光散射(DLS)
            2.2.7.5 临界胶束浓度(CMC)测定
            2.2.7.6 圆二色光谱(CD)测定多肽二级结构
            2.2.7.7 透射电子显微镜(TEM)
    2.3 结果及讨论
        2.3.1 EK dimer (with boc), EK dimer (without boc),poly(EK), Lira-MA的核磁表征
        2.3.2 poly(EK),poly(EK)-Lira的GPC表征
        2.3.3 poly(EK)与Lira-MA反应效率计算
        2.3.4 poly(EK)-Lira胶束表征
        2.3.5 多肽二级结构分析
    2.4 本章小结
第3章 两性离子多肽poly(EK)修饰的GLP-1衍生物的体外活性研究
    3.1 引言
    3.2 poly(EK)-Lira对INS1细胞增殖作用的研究
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验仪器设备
        3.2.3 实验操作
        3.2.4 实验结果与结论
    3.3 poly(EK)-Lira对促进INS1细胞胰岛素分泌的研究
        3.3.1 实验材料
        3.3.2 实验仪器设备
        3.3.3 实验操作
        3.3.4 实验结果与讨论
    3.4 本章小结
第4章 两性离子多肽poly(EK)修饰的GLP-1衍生物的体内活性研究
    4.1 引言
    4.2 实验部分
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验仪器设备
        4.2.3 Ⅱ型糖尿病SD大鼠的模型建立
        4.2.4 poly(EK)-Lira体内血糖控制能力测定
        4.2.5 poly(EK)-Lira体内血药浓度测定
        4.2.6 Cy5.5-poly(EK)-Lira在注射部位滞留情况研究
    4.3 实验结果与分析
        4.3.1 影响SD大鼠成功造模的关键因素分析
        4.3.2 poly(EK)-Lira体内血糖控制效果与分析
        4.3.3 poly(EK)-Lira体内血药浓度测定结果与分析
        4.3.4 Cy5.5-poly(EK)-Lira在注射部位滞留情况的观察与分析
    4.4 本章小结
第5章 两性离子多肽poly(EK)修饰的GLP-1衍生物的体内免疫原性研究
    5.1 引言
    5.2 实验部分
        5.2.1 实验材料
        5.2.2 实验仪器设备
        5.2.3 poly(EK)-Lira在大鼠注射部位的免疫原性研究
        5.2.4 poly(EK)-Lira在大鼠体内的免疫原性研究
    5.3 实验结果与分析
        5.3.1 poly(EK)-Lira皮下注射部位染色切片的观察与分析
        5.3.2 SD大鼠血生化、血常规结果分析
        5.3.3 SD大鼠血清中抗poly(EK)抗体的测定结果与分析
    5.4 本章小结
第6章 总结与展望
    6.1 总结
    6.2 展望
参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]SD大鼠血液学指标、血生化指标及脏体比正常值范围探讨[J]. 蒋中仁,徐薇,金伟,王睿,刘科亮,谢惠萍,卢润生.  预防医学情报杂志. 2011(10)
[2]SD大鼠血常规指标正常参考值范围探讨[J]. 刘科亮,王林,王睿,敬明武,葛宇杰,刘以农,陈琼瑶,谢惠萍.  预防医学情报杂志. 2009(09)



本文编号：3721365