产酶溶杆菌抗菌代谢物HSAF高产菌株选育的研究

发布时间：2023-04-03 19:13

　　产酶溶杆菌属黄单胞科,溶杆菌属,是一种在环境中广泛存在的新型植物病害生防细菌。而HSAF(Heat-Stable Antifungal Factor)是其产生的一种小分子抗菌物质,其能够对多种真菌和卵菌产生抑制作用,在生物防治中发挥着重要作用,是一种结构和作用方式全新的广谱抗真菌、卵菌活性物质。生产无农药残留、无病虫危害的农业产品一直是促进人类自身健康和保护生态环境的重要途径,也是生物防治药物研究领域的主要目标。而HSAF作为一种环境友好型杀菌剂,具有开发为新型生物源农药的巨大潜力。然而现阶段HSAF的产量太低,无法实现工业化大规模生产,一定程度上制约了其在病害防治中的广泛应用和推广。因此获得HSAF高产菌株,提高HSAF产量是当前亟需解决的问题。本研究以HSAF为研究对象,以产酶溶杆菌OH11为出发菌株,采用三种方法进行HSAF高产菌株的选育。通过紫外诱变、HSAF负调控基因的敲除、HSAF生物合成基因及其正调控基因的启动子改造,构建了多个不同的突变菌株,并对其HSAF产量进行评估。通过紫外诱变,筛选到3株HSAF高产菌株,其HSAF产量与野生型相比分别提高了 36%、33%和25%...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 产酶溶杆菌研究进展
        1.1.1 产酶溶杆菌的分类
        1.1.2 产酶溶杆菌的生物学特征
        1.1.3 产酶溶杆菌的生防作用
        1.1.4 胞外水解酶
        1.1.5 WAP-8294A
        1.1.6 热稳定抗真菌因子HSAF
        1.1.7 HSAF生物合成的遗传调控
    1.2 微生物高产菌株选育策略
        1.2.1 诱变育种
        1.2.2 核糖体工程
        1.2.3 代谢工程
        1.2.4 基因组改组技术
    1.3 本研究的目的意义与主要研究内容
        1.3.1 本研究的目的与意义
        1.3.2 主要研究内容
第2章 紫外诱变选育HSAF高产菌株
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 实验方法
    2.3 结果与分析
        2.3.1 生长曲线的测定
        2.3.2 致死率曲线的测定
        2.3.3 HSAF高产菌株的筛选
        2.3.4 遗传稳定性实验
    2.4 小结与讨论
第3章 敲除负调控基因选育HSAF高产菌株
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 实验方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 三个HSAF负调控基因的调控作用验证
        3.3.2 双突变菌株敲除突变体的构建
        3.3.3 双突变菌株的HSAF产量评估
        3.3.4 三突变菌株敲除突变体的构建
        3.3.5 三突变菌株的HSAF产量评估
    3.4 小结与讨论
第4章 HSAF合成基因及其正调控基因的启动子改造选育HSAF高产菌株
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 实验方法
    4.3 结果与分析
        4.3.1 将强启动子插入HSAF合成基因启动子之前
        4.3.2 用强启动子替换HSAF合成基因启动子
        4.3.3 用强启动子替换HSAF正调控基因启动子
    4.4 小结与讨论
第5章 结论与展望
    5.1 主要结论
    5.2 展望
参考文献
在读期间发表的学术论文及研究成果
致谢



本文编号：3780986