分枝杆菌转化植物甾醇生成雄烯二酮工艺条件研究

发布时间：2023-04-29 02:39

　　雄烯二酮(简称AD),是一类内源性类固醇激素,可由人体性腺及肾上腺分泌,是体内雄性激素合成途径中睾酮的直接前体,也是雌性激素合成途径中雌激素的前体。它在合理控制雄激素和雌激素的平衡中起到至关重要的作用。另外,AD还是甾体药物合成的重要中间体,通过AD几乎可以合成所有的甾体药物。本文首先对AD种子培养基配方进行了优化。通过单因素实验、正交实验,得到最适的种子培养基配方和培养时间。其次针对植物甾醇疏水性的问题,研究了有机溶剂、深共熔试剂、表面活性剂、环糊精等助溶剂和两相体系对发酵产AD的影响,确定两相体系发酵的产率最高。然后选择正交实验对两相体系发酵进行优化,当植物甾醇浓度为10 g/L,有机相为大豆油、所占比例为16%,AD产率最高为42.15%(w/w),此时AD浓度为2.83 g/L。接下来探究了摇瓶温度、转速、装液量、接种量、初始p H值、培养时间等发酵条件对产AD的影响。优化后的发酵条件为:温度为30℃、初始p H值8.0、转速200 rpm、接种量20%、装液量150 m L,发酵6天后AD产率达50.37%(w/w),AD浓度为3.39 g/L,底物转化率为76.42%(w/...

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1 绪论
    1.1 甾体化合物的概述
    1.2 植物甾醇和雄烯二酮的概述
        1.2.1 植物甾醇的简介
        1.2.2 雄烯二酮的简介
    1.3 AD的生产方法
        1.3.1 化学合成法
        1.3.2 微生物转化法
    1.4 研究背景
        1.4.1 微生物发酵生产AD菌种选育
        1.4.2 AD发酵工艺条件研究
        1.4.3 游离细胞转化技术
    1.5 研究意义
    1.6 主要研究内容
2 雄烯二酮发酵工艺条件研究
    2.1 材料与方法
        2.1.1 菌株
        2.1.2 主要实验仪器
        2.1.3 主要实验试剂
        2.1.4 培养基配方和培养方法
        2.1.5 底物和产物的检测方法
    2.2 实验方法
        2.2.1 种子培养基成分的优化
        2.2.2 菌体生长曲线的测定
        2.2.3 助溶剂对发酵结果的影响
        2.2.4 摇瓶发酵培养条件的优化
    2.3 结果和讨论
        2.3.1 种子培养基的优化
        2.3.2 菌体的生长曲线
        2.3.3 助溶剂对发酵结果的影响
        2.3.4 摇瓶发酵培养条件的优化
    2.4 本章小结
3 游离细胞法转化植物甾醇生成雄烯二酮工艺条件研究
    3.1 材料与方法
        3.1.1 菌种和培养基
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 实验试剂
        3.1.4 游离细胞的收集
        3.1.5 底物和产物的检测方法
    3.2 实验方法
        3.2.1 助溶剂的选择
        3.2.2 游离细胞法生成AD工艺优化
        3.2.3 反复分批转化实验
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 助溶剂的选择
        3.3.2 游离细胞法生成AD工艺优化
        3.3.3 反复分批转化实验
    3.4 本章小结
4 雄烯二酮分离提取的初步研究
    4.1 材料与仪器
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验药品
        4.1.3 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 除去菌体
        4.2.2 萃取
        4.2.3 活性炭脱色
        4.2.4 低温结晶
        4.2.5 产品纯度分析
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 除去转化液含的菌体
        4.3.2 萃取条件对萃取效果的影响
        4.3.3 活性炭脱色的研究
        4.3.4 AD产品的结晶
        4.3.5 产品纯度分析
    4.4 本章小结
5 讨论
参考文献
攻读学位期间发表的学术成果目录
致谢



本文编号：3804994