九种半乳糖凝集素的制备及其与真菌多糖相互作用的研究
发布时间：2023-05-07 19:17
半乳糖凝集素(Galectins)是一类能够特异性结合β-半乳糖的动物凝集素,目前已发现16种,分为原型,嵌合型,串联重复型三种类型。半乳糖凝集素广泛参与生物体的多种生理活动,具有调节细胞内糖蛋白运输、细胞粘附、迁移、生长和凋亡等功能,与免疫、炎症和癌症等多种疾病相关。在癌症检测方面,半乳糖凝集素可能作为诊断癌症的重要免疫组织化学标志物,是目前治疗癌症的药物靶点之一。但目前,多种半乳糖凝集素的制备方法及保存条件仍不完善,限制了对半乳糖凝集素结构及功能的研究。因此,本论文通过构建原核表达体系,研究了稳定、大量制备9种半乳糖凝集素的方法,并对其保存条件进行了优化,为半乳糖凝集素的研究奠定物质基础。真菌多糖具有多种活性,毒副作用小,来源广泛,可作为开发半乳糖凝集素抑制剂的重要资源。目前对于半乳糖凝集素与真菌多糖相互作用的研究报道较少。为了促进半乳糖凝集素抑制剂的开发,本论文研究了5种半乳糖凝集素与7种真菌多糖级分的相互作用,以其寻找半乳糖凝集素的真菌多糖类配体。为半乳糖凝集素抑制剂的研究和真菌多糖的药物开发及肿瘤治疗奠定理论基础。具体研究内容和结果如下:制备了9种半乳糖凝集素。通过构建半乳糖...
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文对照及英文缩写词表
第一章 前言
1.1 半乳糖凝集素(Galectins)家族概述
1.1.1 半乳糖凝集素的结构与分类
1.1.2 半乳糖凝集素的分布与功能
1.1.3 半乳糖凝集素制备的研究进展
1.1.4 半乳糖凝集素多糖类抑制剂的研究进展
1.2 真菌多糖的概述
1.2.1 真菌多糖的组成与结构
1.2.2 真菌多糖的功能
1.2.3 青霉菌多糖的研究现状
1.2.4 杏鲍菇多糖的研究现状
1.2.5 平菇多糖的研究现状
1.3 半乳糖凝集素与真菌多糖相互作用的研究现状
1.4 选题依据和研究意义
第二章 半乳糖凝集素的表达纯化
2.1 实验材料、试剂及仪器
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂
2.1.3 试剂配制
2.1.4 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 半乳糖凝集素重组质粒的构建
2.2.2 感受态细胞E.coli DH5α的制备
2.2.3 重组质粒的转化验证
2.2.4 菌落PCR检验阳性克隆
2.2.5 双酶切验证重组质粒
2.2.6 工程菌的保存
2.2.7 半乳糖凝集素的制备
2.2.8 考马斯亮蓝定量法检测蛋白浓度
2.2.9 SDS-PAGE法检测目的蛋白纯度
2.3 实验结果
2.3.1 菌落PCR验证阳性克隆
2.3.2 双酶切验证重组质粒
2.3.3 半乳糖凝集素的制备
2.4 讨论
第三章 半乳糖凝集素保存条件的优化
3.1 实验材料、试剂及仪器
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验试剂
3.1.3 试剂配制
3.1.4 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 半乳糖凝集素的保存条件
3.2.2 SDS-PAGE法检测目的蛋白纯度
3.2.3 红细胞的制备
3.2.4 红细胞凝集实验检测目的蛋白活性
3.2.5 目的蛋白的复溶
3.3 实验结果
3.3.1 SDS-PAGE法检测目的蛋白纯度
3.3.2 红细胞凝集实验
3.3.3 红细胞凝集实验检测目的蛋白活性
3.3.4 蛋白复溶后得率统计
3.4 讨论
第四章 半乳糖凝集素与真菌多糖的相互作用
4.1 实验材料、试剂及仪器
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验试剂
4.1.3 试剂配制
4.1.4 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 半乳糖凝集素诱导红细胞凝集
4.2.2 乳糖抑制半乳糖凝集素诱导的红细胞凝集
4.2.3 真菌多糖抑制半乳糖凝集素诱导的红细胞凝集
4.3 实验结果
4.3.1 Gal-1与真菌多糖的相互作用
4.3.2 Gal-3与真菌多糖的相互作用
4.3.3 Gal-4与真菌多糖的相互作用
4.3.4 Gal-7与真菌多糖的相互作用
4.3.5 Gal-8与真菌多糖的相互作用
4.4 讨论
论文总结
参考文献
致谢
在学期间公开发表论文及著作情况
本文编号：3811177
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文对照及英文缩写词表
第一章 前言
1.1 半乳糖凝集素(Galectins)家族概述
1.1.1 半乳糖凝集素的结构与分类
1.1.2 半乳糖凝集素的分布与功能
1.1.3 半乳糖凝集素制备的研究进展
1.1.4 半乳糖凝集素多糖类抑制剂的研究进展
1.2 真菌多糖的概述
1.2.1 真菌多糖的组成与结构
1.2.2 真菌多糖的功能
1.2.3 青霉菌多糖的研究现状
1.2.4 杏鲍菇多糖的研究现状
1.2.5 平菇多糖的研究现状
1.3 半乳糖凝集素与真菌多糖相互作用的研究现状
1.4 选题依据和研究意义
第二章 半乳糖凝集素的表达纯化
2.1 实验材料、试剂及仪器
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂
2.1.3 试剂配制
2.1.4 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 半乳糖凝集素重组质粒的构建
2.2.2 感受态细胞E.coli DH5α的制备
2.2.3 重组质粒的转化验证
2.2.4 菌落PCR检验阳性克隆
2.2.5 双酶切验证重组质粒
2.2.6 工程菌的保存
2.2.7 半乳糖凝集素的制备
2.2.8 考马斯亮蓝定量法检测蛋白浓度
2.2.9 SDS-PAGE法检测目的蛋白纯度
2.3 实验结果
2.3.1 菌落PCR验证阳性克隆
2.3.2 双酶切验证重组质粒
2.3.3 半乳糖凝集素的制备
2.4 讨论
第三章 半乳糖凝集素保存条件的优化
3.1 实验材料、试剂及仪器
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验试剂
3.1.3 试剂配制
3.1.4 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 半乳糖凝集素的保存条件
3.2.2 SDS-PAGE法检测目的蛋白纯度
3.2.3 红细胞的制备
3.2.4 红细胞凝集实验检测目的蛋白活性
3.2.5 目的蛋白的复溶
3.3 实验结果
3.3.1 SDS-PAGE法检测目的蛋白纯度
3.3.2 红细胞凝集实验
3.3.3 红细胞凝集实验检测目的蛋白活性
3.3.4 蛋白复溶后得率统计
3.4 讨论
第四章 半乳糖凝集素与真菌多糖的相互作用
4.1 实验材料、试剂及仪器
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验试剂
4.1.3 试剂配制
4.1.4 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 半乳糖凝集素诱导红细胞凝集
4.2.2 乳糖抑制半乳糖凝集素诱导的红细胞凝集
4.2.3 真菌多糖抑制半乳糖凝集素诱导的红细胞凝集
4.3 实验结果
4.3.1 Gal-1与真菌多糖的相互作用
4.3.2 Gal-3与真菌多糖的相互作用
4.3.3 Gal-4与真菌多糖的相互作用
4.3.4 Gal-7与真菌多糖的相互作用
4.3.5 Gal-8与真菌多糖的相互作用
4.4 讨论
论文总结
参考文献
致谢
在学期间公开发表论文及著作情况
本文编号：3811177
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