右旋糖酐酶在右旋糖酐生产中的应用

发布时间：2023-05-08 00:05

　　右旋糖酐是一种聚D-葡萄糖,其葡萄糖残基以α-1,6-糖苷键连接成主链,支链则由葡萄糖残基或葡萄糖链(简单或复杂的)以α-1,2-、α-1,3-或α-1,4-糖苷键连接在主链上,主要用途包括代血浆药物、益生元、药物基质或载体等。右旋糖酐传统生产工艺是利用微生物发酵蔗糖产生大分子右旋糖酐后,通过酸解将其分子量降低到一定范围,再精制而得。本研究将开发一种新工艺,在发酵过程中加入右旋糖酐酶,使发酵结束时右旋糖酐的分子量处于较低、较窄范围。新工艺主要优点有二,一是省去酸解和中和工艺,免去强酸强碱使用,精简工艺流程;二是降低发酵液粘度,提高发酵效率。右旋糖酐酶在新工艺中发挥核心作用,其酶活可通过与底物溶液(含2 g/d L dextran T-2150的Na₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲液)反应后用DNS法测定还原端增量的方法测定。在单因素试验中,测得其最适反应温度、p H、离子强度分别是60/65°C(无显著性差异)、5.5、0.015 mol/L。在模拟发酵条件(dextran T-2150、蔗糖、细菌学蛋...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 右旋糖酐酶
        1.1.1 右旋糖酐酶的概况
        1.1.2 右旋糖酐酶的应用
        1.1.3 广东省生物工程研究所右旋糖酐酶开发概况
    1.2 右旋糖酐
        1.2.1 右旋糖酐的概况及应用
        1.2.2 右旋糖酐的生产
    1.3 右旋糖酐酶在右旋糖酐生产中的应用概况
    1.4 课题意义、来源及主要研究内容
        1.4.1 课题意义及来源
        1.4.2 主要研究内容
第二章 右旋糖酐酶的酶学性质研究
    2.1 实验设计思路和设计计算
        2.1.1 右旋糖酐酶酶活测定方法的选择
        2.1.2 酶促反应体系的设计计算及酶活测定方法的建立
        2.1.3 右旋糖酐酶K_m值的测定
    2.2 仪器与试剂
        2.2.1 仪器
        2.2.2 试剂
    2.3 方法
        2.3.1 葡萄糖、dextran T-2150 的水分测定
        2.3.2 各种溶液的配制
        2.3.3 DNS法葡萄糖质量-吸光度标准曲线的制作
        2.3.4 单因素试验设计
        2.3.5 酶活测定方法的建立和右旋糖酐酶酶活定义及测定
        2.3.6 右旋糖酐酶在模拟右旋糖酐发酵过程中的酶学表现
        2.3.7 右旋糖酐酶在最适条件和实际应用条件的K_m值测定
        2.3.8 模拟发酵结束后灭活条件对酶活的影响
        2.3.9 条件恢复对右旋糖酐酶的酶活影响
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 葡萄糖、dextran T-2150 的水分测定
        2.4.2 标准曲线的绘制
        2.4.3 单因素试验结果与分析
        2.4.4 右旋糖酐酶酶液的酶活测定
        2.4.5 右旋糖酐酶在模拟右旋糖酐发酵条件的酶活力
        2.4.6 右旋糖酐酶K_m值的测定
        2.4.7 模拟发酵结束后灭活条件对酶活的影响
        2.4.8 条件恢复对右旋糖酐酶的酶活影响
    2.5 小结
第三章 酶解过程右旋糖酐分子量变化规律研究
    3.1 实验设计思路和设计计算
        3.1.1 右旋糖酐分子量的测定
        3.1.2 模拟边合成边水解的新工艺过程
        3.1.3 加酶量的计算
    3.2 仪器与试剂
        3.2.1 仪器
        3.2.2 试剂
    3.3 方法
        3.3.1 右旋糖酐分子量测定方法的建立及分子量的测定
        3.3.2 小分子水解物的液相色谱分析
        3.3.3 T-2150的分子量测定
        3.3.4 右旋糖酐酸解规律探究
        3.3.5 右旋糖酐酶解规律探究
        3.3.6 模拟边合成边水解工艺的右旋糖酐分子量变化
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 右旋糖酐分子量标准曲线
        3.4.2 小分子水解物标准曲线
        3.4.3 右旋糖酐酸解和酶解规律研究
        3.4.4 模拟边合成边水解工艺的右旋糖酐分子量变化
    3.5 小结
第四章 右旋糖酐发酵新工艺的研究
    4.1 实验设计思路和设计计算
        4.1.1 发酵菌种和发酵条件
        4.1.2 分析发酵状态的指标
        4.1.3 新工艺开发思路
    4.2 仪器与试剂
        4.2.1 仪器
        4.2.2 菌种和试剂
    4.3 方法
        4.3.1 培养基的配制
        4.3.2 种子液的培养
        4.3.3 传统工艺的发酵状态研究
        4.3.4 新工艺的发酵状态和产物分子量分布研究
        4.3.5 各指标的检测方法
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 蔗糖、果糖的标准曲线
        4.4.2 传统工艺和新工艺的发酵状态对比
        4.4.3 传统工艺和新工艺的右旋糖酐分子量分布对比
    4.5 小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的论文
致谢



本文编号：3811591