细胞表面囊泡作为阿霉素药物载体的抗肿瘤药效的初步研究

发布时间：2023-05-21 21:57

　　近年来随着我国人口老龄化、生产工业化带来环境污染、城市化进程加快带来生活习惯的改变等因素,人们的肿瘤患病率和死亡率明显提高。肿瘤的预防、治疗,以及相关的药物研发,得到越来越多的科研团队的重视。阿霉素(Doxorubicin,简称为Dox)是一种广谱、有效的抗癌药物,但对心脏、肝脏、骨髓等有较强的毒副作用。为此,科学家们提出了很多解决办法,利用药物载体是较有潜力的策略之一。多种细胞表面存在着细胞表面囊泡(Cell-bound membrane vesicles,简称为CBMVs)。本课题组前期对细胞表面囊泡进行了较多的研究,例如对囊泡的鉴定、特性表征、运动规律等,并已对该种囊泡的分离和纯化做了初步探索。在此基础上,我们推测,细胞表面囊泡也许可作为一种潜在的抗肿瘤药物的载体系统,来解决阿霉素的毒副作用等问题。为了验证这个推测,本课题使用去污剂处理和蔗糖梯度高速离心法从体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表面分离、纯化了细胞表面囊泡,通过声波降解法装载阿霉素,得到阿霉素-细胞表面囊泡(简称阿霉素-囊泡;其包封率和载药量分别为44.77%±2.71%和2.36%±0.05%)。使用共聚焦...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 癌症
    1.2 结肠癌
    1.3 阿霉素
    1.4 纳米药物载体用于肿瘤的检测及治疗
    1.5 细胞表面囊泡
    1.6 本课题的研究目的、内容和意义
第2章 囊泡的提取、载药及鉴定
    2.1 材料与设备
        2.1.1 主要实验试剂
        2.1.2 主要实验设备
        2.1.3 细胞
        2.1.4 主要试剂配制
            2.1.4.1 PBS缓冲溶液
            2.1.4.2 HUVEC细胞培养液
            2.1.4.3 磷钨酸溶液
            2.1.4.4 高效液相色谱的流动相配制
            2.1.4.5 Triton X-100溶液的配制
            2.1.4.6 10%的蔗糖溶液
            2.1.4.7 透析袋处理
    2.2 实验方法
        2.2.1 人脐静脉内皮细胞HUVEC的培养
            2.2.1.1 细胞复苏
            2.2.1.2 细胞传代
            2.2.1.3 细胞冻存
        2.2.2 囊泡的提取
        2.2.3 囊泡计数
        2.2.4 囊泡载药
        2.2.5 囊泡载药的激光共聚焦显微镜观察
        2.2.6 粒径和Zeta电位的检测
        2.2.7 透射电子显微镜的检测
        2.2.8 药物体外释放检测
        2.2.9 包封率、载药量的检测
        2.2.10 囊泡来源检测
    2.3 实验结果
        2.3.1 囊泡的计数
        2.3.2 囊泡载药的激光共聚焦显微镜观察
        2.3.3 粒径和Zeta电位结果
        2.3.4 囊泡的形貌、大小
        2.3.5 体外释放
        2.3.6 包封率和载药量
        2.3.7 囊泡来源的检测
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 囊泡载药药效的初步检测
    3.1 材料与设备
        3.1.1 主要实验试剂
        3.1.2 主要实验设备
        3.1.3 细胞
        3.1.4 小鼠
        3.1.5 主要试剂配制
            3.1.5.1 PBS缓冲溶液
            3.1.5.2 细胞培养液
            3.1.5.3 MTT溶液
            3.1.5.4 5% BSA封闭液
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞的培养
        3.2.2 细胞吞噬实验
        3.2.3 细胞存活实验
        3.2.4 小鼠结肠癌肿瘤模型的建立、给药
        3.2.5 药物堆积
        3.2.6 石蜡切片
        3.2.7 血液检测
        3.2.8 HE染色
        3.2.9 免疫组化
        3.2.10 TUNEL法检测组织内细胞凋亡
    3.3 实验结果
        3.3.1 阿霉素-囊泡的细胞识别和内吞
        3.3.2 阿霉素-囊泡的体外肿瘤细胞杀伤效果
        3.3.3 小鼠体重
        3.3.4 阿霉素-囊泡对小鼠体内肿瘤生长的抑制效果
        3.3.5 药物堆积实验显示阿霉素-囊泡的缓释效果
        3.3.6 阿霉素-囊泡能够减轻阿霉素的毒副作用
        3.3.7 组织切片HE染色显示阿霉素-囊泡的抗肿瘤作用
        3.3.8 磷酸化组蛋白的荧光免疫组化展示阿霉素-囊泡对肿瘤细胞分裂的抑制作用
        3.3.9 TUNEL法检测阿霉素-囊泡对小鼠肿瘤组织内细胞凋亡的诱导作用
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 总结和展望
    4.1 总结
    4.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果



本文编号：3821498