蛋白水解法产生的稳定性抗氧化多肽及功能分析
发布时间：2023-06-17 12:08
多肽类抗氧化剂由于其抗氧化效率远远高于非多肽类抗氧化剂而成为具有广泛应用价值的抗氧化活性成份,但是活性多肽和多数活性蛋白一样往往在高温等极端应用环境下不够稳定,这已成为制约其在化妆品、保健品及药品中广泛应用的最主要因素。本项目通过酶解法及高温筛选,从酪蛋白中获得能够在高温下保持良好抗氧化活力的稳定性生物活性肽,并对其生理功能及结构组成进行分析,为抗氧化肽功能特性的发掘及温度耐受机制的研究提供参考,也为功能性食品的开发应用奠定基础。研究结果如下:1、采用单因素及正交试验,以超氧阴离子自由基、DPPH·自由基及羟自由基清除能力为检测指标,对酪蛋白水解条件进行优化,在底物浓度10%、55℃、pH 6.5、反应时间4 h、酶用量35μL的条件获得了抗氧化活性较高的蛋白水解产物。2、确定了耐高温抗氧化多肽的筛选条件。对优化水解条件所得抗氧化活性较高的水解产物进行70、80、90、100℃高温筛选,以3种自由基清除能力为指标,确定水解组合A3B2C1D3在100℃处理25 min后,得到具有良好温度耐受性及抗氧...
【文章页数】：123 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 乳蛋白研究进展
1.1.1 乳蛋白的成分构成及结构特征
1.1.2 乳蛋白水解物活性成分相关研究
1.2 蛋白水解产生抗氧化肽的相关研究进展
1.2.1 抗氧化肽的来源
1.2.2 抗氧化肽的制备工艺
1.2.3 抗氧化肽的抗氧化活性测定方法
1.2.4 抗氧化肽的分离纯化技术
1.2.5 抗氧化肽的组成及结构鉴定方法
1.2.6 抗氧化肽的生理功能研究
1.2.7 抗氧化肽的稳定性研究
1.2.8 抗氧化肽的开发应用
1.3 热稳定性蛋白研究进展
1.4 研究思路和研究内容
1.4.1 研究思路
1.4.2 研究主要内容
1.4.3 技术线路图
第二章 酪蛋白水解产生抗氧化多肽的工艺研究
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 材料
2.2.2 仪器与设备
2.2.3 实验方法
2.3 结果与分析
2.3.1 酪蛋白酶解反应最优酶选择
2.3.2 水解条件优化
2.3.3 正交试验及抗氧化活性综合分析
2.3.4 验证实验
2.4 讨论
第三章 蛋白水解液中热稳定性抗氧化多肽诱导筛选
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 材料
3.2.2 仪器与设备
3.2.3 实验方法
3.3 结果与分析
3.3.1 耐高温多肽预筛选
3.3.2 高温处理条件确定
3.3.3 三氯乙酸除蛋白后抗氧化能力分析
3.3.4 耐高温抗氧化多肽稳定性评价
3.4 讨论
第四章 热稳定性抗氧化多肽液相色谱分析
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 材料与试剂
4.2.2 仪器与设备
4.2.3 实验方法
4.3 结果与分析
4.3.1 酪蛋白水解物RP-HPLC波长选择
4.3.2 酪蛋白水解物RP-HPLC洗脱程序选择
4.3.3 酪蛋白水解物RP-HPLC方法重复性分析
4.3.4 高温处理对酪蛋白水解物液相色谱分析
4.4 讨论
第五章 热稳定性抗氧化多肽生理功能验证
5.1 引言
5.2 实验试剂及仪器
5.2.1 主要试剂
5.2.2 仪器与设备
5.2.3 实验方法
5.3 结果与讨论
5.3.1 H2O2 诱导HUVE细胞损伤模型的建立
5.3.2 耐高温抗氧化多肽对HUVE细胞毒性分析
5.3.3 耐高温抗氧化多肽对H2O2 诱导的HUVE细胞氧化应激损伤的保护作用
5.3.4 细胞形态观察
5.3.5 耐高温抗氧化多肽对H2O2 诱导损伤的HUVE细胞胞外乳酸脱氢酶影响
5.3.6 耐高温抗氧化多肽对H2O2 诱导损伤的HUVE细胞氧化还原酶系影响
5.3.7 耐高温抗氧化多肽预处理对Caspase-3 蛋白表达的影响
5.4 讨论
第六章 热稳定性抗氧化多肽分离纯化
6.1 引言
6.2 材料与方法
6.2.1 材料
6.2.2 仪器与设备
6.2.3 实验方法
6.3 结果与分析
6.3.1 葡聚糖凝胶层析分离多肽结果
6.3.2 离子交换色谱法分离多肽结果
6.3.3 分离纯化多肽的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
6.4 讨论
第七章 热稳定性抗氧化多肽生物信息学分析
7.1 引言
7.2 材料与方法
7.2.1 材料
7.2.2 仪器与设备
7.2.3 实验方法
7.3 结果与分析
7.3.1 样品多肽质谱鉴定结果分析
7.3.2 耐高温抗氧化多肽的筛选及功能注释
7.3.3 耐高温抗氧化多肽的氨基酸组成及相关理化性质分析
7.3.4 耐高温抗氧化多肽疏水性分析
7.3.5 耐高温抗氧化多肽信号肽预测
7.3.6 耐高温抗氧化多肽二级结构预测
7.4 讨论
第八章 总结与展望
8.1 研究结论
8.2 展望
参考文献
研究生期间发表论文
致谢
本文编号：3834061
【文章页数】：123 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 乳蛋白研究进展
1.1.1 乳蛋白的成分构成及结构特征
1.1.2 乳蛋白水解物活性成分相关研究
1.2 蛋白水解产生抗氧化肽的相关研究进展
1.2.1 抗氧化肽的来源
1.2.2 抗氧化肽的制备工艺
1.2.3 抗氧化肽的抗氧化活性测定方法
1.2.4 抗氧化肽的分离纯化技术
1.2.5 抗氧化肽的组成及结构鉴定方法
1.2.6 抗氧化肽的生理功能研究
1.2.7 抗氧化肽的稳定性研究
1.2.8 抗氧化肽的开发应用
1.3 热稳定性蛋白研究进展
1.4 研究思路和研究内容
1.4.1 研究思路
1.4.2 研究主要内容
1.4.3 技术线路图
第二章 酪蛋白水解产生抗氧化多肽的工艺研究
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 材料
2.2.2 仪器与设备
2.2.3 实验方法
2.3 结果与分析
2.3.1 酪蛋白酶解反应最优酶选择
2.3.2 水解条件优化
2.3.3 正交试验及抗氧化活性综合分析
2.3.4 验证实验
2.4 讨论
第三章 蛋白水解液中热稳定性抗氧化多肽诱导筛选
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 材料
3.2.2 仪器与设备
3.2.3 实验方法
3.3 结果与分析
3.3.1 耐高温多肽预筛选
3.3.2 高温处理条件确定
3.3.3 三氯乙酸除蛋白后抗氧化能力分析
3.3.4 耐高温抗氧化多肽稳定性评价
3.4 讨论
第四章 热稳定性抗氧化多肽液相色谱分析
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 材料与试剂
4.2.2 仪器与设备
4.2.3 实验方法
4.3 结果与分析
4.3.1 酪蛋白水解物RP-HPLC波长选择
4.3.2 酪蛋白水解物RP-HPLC洗脱程序选择
4.3.3 酪蛋白水解物RP-HPLC方法重复性分析
4.3.4 高温处理对酪蛋白水解物液相色谱分析
4.4 讨论
第五章 热稳定性抗氧化多肽生理功能验证
5.1 引言
5.2 实验试剂及仪器
5.2.1 主要试剂
5.2.2 仪器与设备
5.2.3 实验方法
5.3 结果与讨论
5.3.1 H2O2 诱导HUVE细胞损伤模型的建立
5.3.2 耐高温抗氧化多肽对HUVE细胞毒性分析
5.3.3 耐高温抗氧化多肽对H2O2 诱导的HUVE细胞氧化应激损伤的保护作用
5.3.4 细胞形态观察
5.3.5 耐高温抗氧化多肽对H2O2 诱导损伤的HUVE细胞胞外乳酸脱氢酶影响
5.3.6 耐高温抗氧化多肽对H2O2 诱导损伤的HUVE细胞氧化还原酶系影响
5.3.7 耐高温抗氧化多肽预处理对Caspase-3 蛋白表达的影响
5.4 讨论
第六章 热稳定性抗氧化多肽分离纯化
6.1 引言
6.2 材料与方法
6.2.1 材料
6.2.2 仪器与设备
6.2.3 实验方法
6.3 结果与分析
6.3.1 葡聚糖凝胶层析分离多肽结果
6.3.2 离子交换色谱法分离多肽结果
6.3.3 分离纯化多肽的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
6.4 讨论
第七章 热稳定性抗氧化多肽生物信息学分析
7.1 引言
7.2 材料与方法
7.2.1 材料
7.2.2 仪器与设备
7.2.3 实验方法
7.3 结果与分析
7.3.1 样品多肽质谱鉴定结果分析
7.3.2 耐高温抗氧化多肽的筛选及功能注释
7.3.3 耐高温抗氧化多肽的氨基酸组成及相关理化性质分析
7.3.4 耐高温抗氧化多肽疏水性分析
7.3.5 耐高温抗氧化多肽信号肽预测
7.3.6 耐高温抗氧化多肽二级结构预测
7.4 讨论
第八章 总结与展望
8.1 研究结论
8.2 展望
参考文献
研究生期间发表论文
致谢
本文编号：3834061
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/hxgylw/3834061.html
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