牛跟腱胶原蛋白的制备及生物学评价
发布时间：2023-07-30 18:09
胶原是细胞外基质(ECM)中的结构蛋白,是一种高生物安全性的材料。胶原具有结合、保护、支撑、修复等优良的生物功能,能参与细胞的迁移、分化和增殖,应用研究十分广泛。本文旨在用牛跟腱胶原制备胶原产品并进行生物学性能的研究评价。本文进行如下探究:将牛跟腱经过前处理、脱脂、除重金属、除杂蛋白、酶解等处理提取出胶原原液,并对其进行表征鉴定。再制备交联胶原膜,并进行表观特征和生物学评价。然后再制备中性硼硅玻璃瓶瓶装胶原冻干产品,并对其进行表观特征和生物学评价。本文的研究结果如下:(1)对新鲜的牛跟腱进行去除表面的筋膜、脱去脂肪、除去重金属、除去杂蛋白等一系列的前处理。再用醋酸溶液溶解牛跟腱沉淀,并用胃蛋白酶对其进行酶解。然后通过盐析、透析的方法纯化胶原,得到自制的胶原原液。对胶原提取条件进行优化,结果发现除杂6 h,2.5%的酶用量,酶解4 d,胶原的提取效果最优。通过蛋白含量测定与SDS-PAGE凝胶电泳分析、氨基酸组成分析对提取的胶原原液进行表征验证,结果显示提取胶原的蛋白含量高,纯度好,保持了完整的三螺旋结构,符合Ⅰ型胶原的特征,说明该提取胶原为Ⅰ型胶原。(2)将固含量为0.6%的胶原原液,...
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
主要符号对照表
第1章 前言
1.1 胶原的概述
1.1.1 胶原的简介
1.1.2 胶原的功能特征
1.1.3 胶原的应用
1.2 胶原的提取方法
1.3 胶原的制备方法
1.4 研究内容
1.5 研究目的和意义
第2章 胶原的提取和条件优化
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 原料与试剂
2.1.2 仪器与设备
2.2 实验方法
2.2.1 原材料的前处理
2.2.2 脱脂处理
2.2.3 去除重金属和杂蛋白
2.2.4 酸溶和酶解
2.2.5 胶原粗提液盐析
2.2.6 去除杂蛋白的优化
2.2.7 胶原酶解优化
2.3 结果与分析
2.3.1 脱杂时间对杂蛋白含量的影响
2.3.2 酶解对胶原提取率的影响
2.4 本章小结与讨论
第3章 胶原的表征鉴定
3.1 实验材料与仪器
3.1.1 原料与试剂
3.1.2 仪器与设备
3.2 实验方法
3.2.1 胶原蛋白含量的测定
3.2.2 SDS-PAGE凝胶电泳分离胶原蛋白
3.2.3 羟脯氨酸检测
3.2.4 色氨酸检测
3.2.5 氨基酸成分分析
3.3 结果与分析
3.3.1 胶原蛋白质含量分析
3.3.2 SDS-PAGE凝胶电泳分析
3.3.3 羟脯氨酸分析
3.3.4 色氨酸分析
3.3.5 胶原氨基酸的组成
3.4 本章小结与讨论
第4章 胶原膜的制备与物理性能
4.1 实验材料与仪器
4.1.1 原料与试剂
4.1.2 仪器与设备
4.2 实验方法
4.2.1 胶原膜一次冻干
4.2.2 胶原膜交联
4.2.3 胶原膜二次冻干
4.2.4 交联条件优化
4.2.5 胶原膜显微成像
4.2.6 SEM扫描电镜实验
4.3 结果与分析
4.3.1 交联剂浓度对降解率的影响
4.3.2 交联膜的表面特征
4.3.3 SEM扫描电镜孔隙率
4.4 本章小结与讨论
第5章 胶原膜的生物学评价
5.1 实验材料与仪器
5.1.1 材料与试剂
5.1.2 仪器与设备
5.2 实验方法
5.2.1 巨噬细胞吞噬实验
5.2.2 细胞毒性实验
5.2.3 体液免疫因子检测
5.3 结果与分析
5.3.1 巨噬细胞吞噬实验
5.3.2 细胞毒性实验
5.3.3 体液免疫因子检测
5.4 本章小结与讨论
第6章 胶原冻干品的制备和性能研究
6.1 实验材料与仪器
6.1.1 材料与试剂
6.1.2 仪器与设备
6.2 实验方法
6.2.1 胶原冻干产品的工艺流程
6.2.2 胶原冻干产品预冻条件优化
6.2.3 胶原冻干产品的细胞毒性实验
6.3 结果与分析
6.3.1 预冻方法对胶原冻干产品的影响
6.3.2 胶原蛋白冻干产品对L929细胞毒性影响
6.4 本章小结与讨论
第7章 结论与展望
参考文献
致谢
在学期间的科研情况
本文编号：3837933
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
主要符号对照表
第1章 前言
1.1 胶原的概述
1.1.1 胶原的简介
1.1.2 胶原的功能特征
1.1.3 胶原的应用
1.2 胶原的提取方法
1.3 胶原的制备方法
1.4 研究内容
1.5 研究目的和意义
第2章 胶原的提取和条件优化
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 原料与试剂
2.1.2 仪器与设备
2.2 实验方法
2.2.1 原材料的前处理
2.2.2 脱脂处理
2.2.3 去除重金属和杂蛋白
2.2.4 酸溶和酶解
2.2.5 胶原粗提液盐析
2.2.6 去除杂蛋白的优化
2.2.7 胶原酶解优化
2.3 结果与分析
2.3.1 脱杂时间对杂蛋白含量的影响
2.3.2 酶解对胶原提取率的影响
2.4 本章小结与讨论
第3章 胶原的表征鉴定
3.1 实验材料与仪器
3.1.1 原料与试剂
3.1.2 仪器与设备
3.2 实验方法
3.2.1 胶原蛋白含量的测定
3.2.2 SDS-PAGE凝胶电泳分离胶原蛋白
3.2.3 羟脯氨酸检测
3.2.4 色氨酸检测
3.2.5 氨基酸成分分析
3.3 结果与分析
3.3.1 胶原蛋白质含量分析
3.3.2 SDS-PAGE凝胶电泳分析
3.3.3 羟脯氨酸分析
3.3.4 色氨酸分析
3.3.5 胶原氨基酸的组成
3.4 本章小结与讨论
第4章 胶原膜的制备与物理性能
4.1 实验材料与仪器
4.1.1 原料与试剂
4.1.2 仪器与设备
4.2 实验方法
4.2.1 胶原膜一次冻干
4.2.2 胶原膜交联
4.2.3 胶原膜二次冻干
4.2.4 交联条件优化
4.2.5 胶原膜显微成像
4.2.6 SEM扫描电镜实验
4.3 结果与分析
4.3.1 交联剂浓度对降解率的影响
4.3.2 交联膜的表面特征
4.3.3 SEM扫描电镜孔隙率
4.4 本章小结与讨论
第5章 胶原膜的生物学评价
5.1 实验材料与仪器
5.1.1 材料与试剂
5.1.2 仪器与设备
5.2 实验方法
5.2.1 巨噬细胞吞噬实验
5.2.2 细胞毒性实验
5.2.3 体液免疫因子检测
5.3 结果与分析
5.3.1 巨噬细胞吞噬实验
5.3.2 细胞毒性实验
5.3.3 体液免疫因子检测
5.4 本章小结与讨论
第6章 胶原冻干品的制备和性能研究
6.1 实验材料与仪器
6.1.1 材料与试剂
6.1.2 仪器与设备
6.2 实验方法
6.2.1 胶原冻干产品的工艺流程
6.2.2 胶原冻干产品预冻条件优化
6.2.3 胶原冻干产品的细胞毒性实验
6.3 结果与分析
6.3.1 预冻方法对胶原冻干产品的影响
6.3.2 胶原蛋白冻干产品对L929细胞毒性影响
6.4 本章小结与讨论
第7章 结论与展望
参考文献
致谢
在学期间的科研情况
本文编号：3837933
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