代谢工程改造大肠杆菌积累L—酪氨酸与发酵条件优化

发布时间：2024-02-02 11:27

　　L-酪氨酸(L-Tyrosine,Tyr)是三大芳香族氨基酸之一,在食品、饲料、医药和化工等领域有广泛应用。由于L-酪氨酸代谢途径和调控方式较为复杂,因此合成效率受到制约。本研究是在实验室构建的一株L-苯丙氨酸生产菌的基础上对其进行分子改造,使其能够过量积累L-酪氨酸。此外,对菌株培养条件和发酵过程进行优化,确定了最佳发酵条件和补料方式,进一步强化大肠杆菌合成酪氨酸的能力。本文主要研究结果如下:(1)L-酪氨酸重组菌株的构建和酪氨酸转运系统的改造。通过连续传代消除大肠杆菌(Escherichia coli)WSH-Z06(pAP-B03)菌株的pAP-B03质粒,获得E.coli HGX菌株。构建热诱导表达质粒pAP-aroG^fbr-tyrA^fbr,转化E.coli HGX菌株获得了热诱导型菌株E.coli HGXP,摇瓶发酵L-酪氨酸产量为3.12 g?L^-1,较E.coli HGX菌株提升了110.8%。在E.coli HGXP菌株的基础上分别构建酪氨酸转运系统基因敲除菌E.coli HGPP(HGXPΔaroP)和...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1L-酪氨酸分子结构

图1-1L-酪氨酸分子结构.1-1ThemolecularstructureofL-tyro业及医药业等领域有较大的应用表1-1L-酪氨酸的主要用途Table1-1ApplicationsofL-tyrosineL-酪氨酸可用作治(PKU)的营养补充剂L....

图1-2大肠杆菌中L-酪氨酸合成途径及调控方式

前生产L-酪氨酸的菌株主要有谷氨酸棒状杆菌(Corynebacteriumglutamicu杆菌(Bacillussubtilis)、黄色短杆菌(Brevibacteriumflavum)和大肠杆菌(Esch。代谢工程改造生产L-酪氨酸的进展主要集中在大肠杆菌和谷氨酸棒....

图3-1SDS-PAGE蛋白电泳分析

一株生产L-酪氨酸的大L和tyrC，可以产生43转运系统来生产L-酪氨构建06(pAP-B03)带有pAP-B的关键基因。L-苯丙氨菌必须先将pAP-B03消除质粒的大肠杆菌菌株入E.coliHGX菌株中S-PAGE蛋白电泳分析[6出现了明显的蛋白质特....

图3-2E.coliHGX及HGXP菌株摇瓶发酵结果

对E.coliHGX和HGXP菌株进行了摇瓶发酵试验。由图3-2a可知，菌株生物量(OD600)随时间的推移而增加，菌株E.coliHGX和HGXP的生物量在30h时达到最高值，最高生物量分别为11.8、11.3，在发酵过程中两株菌的最大OD....

本文编号：3892585