单链抗体（scFv）与抗肿瘤多肽（ACP）融合蛋白的设计及其抗肿瘤活性研究

发布时间：2024-02-22 20:34

　　表皮生长因子受体(EGFR),在多数实体瘤中广泛存在,因其过表达与实体瘤的生长以及转移密切相关,被称为癌症的必需生物标志物。西妥昔单抗为应用最广泛的EGFR抗体,与几种同是治疗结直肠癌以及头颈癌等与EGFR过表达有关癌症的抗体,均因尺寸大这一弊端大大影响了其在临床应用中的治疗效率。人源化单链抗体(huscFv)显著的优点就是分子量小,具有较强的穿透力,因其人源化还可以消除一部分鼠抗的免疫原性。本课题以EGFR抗体西妥昔单抗为基础,在其结构上选取VH和VL片段以短肽链Linker连接为单链抗体主要结构,选取实验室已研究出的成熟的抗肿瘤多肽ZXR-2,以Linker连接,设计并合成了 EGFR与抗肿瘤肽ZXR-2融合的蛋白(huscFv-ZXR-2)的氨基酸序列,并反向翻译得到核苷酸序列,对于序列进行人源化优化,使得蛋白可以在大肠杆菌中表达,以未连接ZXR-2的人源化单链抗体huscFv为对照。通过基因工程的方法对这两个片段进行酶切,连接,诱导表达以及纯化,并对诱导表达以及纯化过程中的操作参数进行优化筛选,获得蛋白表达量以及纯度最高的实验参数。然后优化蛋白的复性条件以提高蛋白表达的回收率。...

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１?ＰＥＴ－２８ａ原始质粒图谱??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｍａｐ?ｏｆ?ｏｒｉｇｉｎａｌ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＰＥＴ－２８ａ??２．２．２

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?北京化工大学硕士学位论文???２．４．２目的基因的扩堪??将公司合成完成的菌株进行挑菌涂板提质粒之后，进行琼脂糖跑胶，结果如下??图?２－５：??Ｍａｒｋｅｒ?ｈｕｓｃｆｖ?ｈｏｓｃｆｖ?ＺＸＫ２；??ｍｍｒｎｍ??图２－５?ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳图??Ｆｉｇ．２－５?ＤＮＡ?ａ....

本文编号：3907226