新型多功能Aβ抑制剂的设计合成及其在AD动物模型中的应用
发布时间：2025-02-15 10:21
阿尔茨海默病(AD)是一种进行性和不可逆的神经退行性疾病,影响着全球大约五千万人。大量的证据表明,β-淀粉样蛋白(Aβ)的积累和聚集是AD发病机制的中心事件,进而引发氧化应激,突触损伤和神经元丢失等病理过程。因此,Aβ被认为是AD治疗的潜在靶点。无机纳米材料因其具有结构可调、功能多样和良好的理化稳定性等优点,使其在治疗AD方面的应用受到广泛关注。本论文基于AD的病理特性,设计和合成了四类无机纳米材料用于调控Aβ聚集,促进外周Aβ清除以及缓解Aβ诱导的细胞毒性。取得的成果概括如下:1.结合二硫化钼纳米片的优点和钴配合物明确的化学性质,我们合理构建了一种近红外可控的人工金属蛋白酶(MoS2-Co)。MoS2-Co通过抑制Aβ单体由无规卷曲向β-折叠结构的构象转化,以及破坏Aβ纤维中已形成的β-折叠结构,从而暴露隐藏在β-折叠结构中的蛋白水解位点,规避β-折叠结构对于人工金属蛋白酶水解能力的限制。因此,MoS2-Co可以增强对Aβ单体和聚集体的水解能力。另外,MoS2-Co易于修饰Aβ靶向分子,提高对Aβ的选择性,从而避免非特异性底物的水解反应。该方法也适用于其他淀粉样蛋白的水解。2.其次构建...
【文章页数】：153 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
1.1 阿尔茨海默病简述
1.2 Aβ的产生和清除
1.2.1 Aβ的产生
1.2.2 Aβ的清除
1.3 Aβ纤维化聚集机制
1.4 Aβ聚集体的细胞毒性
1.5 Aβ的靶向治疗
1.5.1 减少Aβ的生成
1.5.2 靶向Aβ的清除
1.6 本论文的研究意义及目的
参考文献
第2章 近红外可控的人工金属酶用于增强Aβ降解
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 试剂
2.2.2 测试和表征
2.2.3 Aβ样品的制备
2.2.4 胰岛素样品的制备
2.2.5 Aβ单体的制备
2.2.6 Aβ纤维的制备
2.2.7 变性Aβ肽的制备
2.2.8 MoS2-PEG的合成
2.2.9 MoS2-PEI的合成
2.2.10 MoS2-Co的合成
2.2.11 MoS2-Co-LVFFA的合成
2.2.12 Aβ聚集体的形貌分析
2.2.13 浊度分析
2.2.14 动态光散射(DLS)测量
2.2.15 十二烷基苯磺酸钠聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)
2.2.16 原子力显微镜(AFM)
2.2.17 基质辅助激光解吸/电离质谱(MALDI-TOF MS)
2.2.18 圆二色(CD)光谱
2.2.19 细胞活力测定
2.2.20 计算方法
2.2.21 模型
2.3 结果与讨论
2.4 本章小结
参考文献
第3章 近红外二区纳米酶用于通过头皮和颅骨减少Aβ沉积
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 试剂
3.2.2 仪器和表征
3.2.3 N-MCNs的合成
3.2.4 Carboxyl-N-MCNs的合成
3.2.5 KD8@N-MCNs的合成
3.2.6 KD8@N-MCNs的光热转化效率
3.2.7 ThT荧光测量
3.2.8 浊度分析
3.2.9 原子力显微镜(AFM)
3.2.10 KD8@N-MCNs的SOD活性测定
3.2.11 KD8@N-MCNs的CAT活性测定
3.2.12 细胞毒性测定
3.2.13 细胞内活性氧(ROS)的检测
3.2.14 KD8@N-MCNs透过血脑屏障的能力
3.2.15 动物模型
3.2.16 离体大脑的近红外荧光成像
3.2.17 KD8@N-MCNs的生物安全性
3.2.18 脑内Aβ的水平
3.2.19 莫里斯水迷宫(MWM)实验
3.3 结果与讨论
3.4 本章小结
参考文献
第4章 近红外靶向增强的外周Aβ清除
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 试剂
4.2.2 仪器与表征
4.2.3 化合物2的制备
4.2.4 化合物3的制备
4.2.5 化合物4的制备
4.2.6 ONA-P分子的制备
4.2.7 上转换纳米粒子(UCNPs)的制备
4.2.8 UCNP@SiO2-NH2的制备
4.2.9 UCNP/ONA-P/K的制备
4.2.10 合成FITC标记的UCNP/ONA-P/K
4.2.11 体外溶血实验
4.2.12 莫里斯水迷宫(MWM)实验
4.2.13 电跳台躲避(step-down)实验
4.2.14 细胞毒性测定
4.2.15 免疫荧光检测肝脏细胞对Aβ的摄取
4.2.16 酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞内Aβ的含量
4.2.17 UCNP/ONA-P/K的生物分布
4.2.18 UCNP/ONA-P/K的药代动力学
4.2.19 免疫组织化学检测3xTg-AD小鼠脑内Aβ的水平
4.3 结果与讨论
4.4 本章小结
参考文献
第5章 自保护的仿生纳米酶用于安全和协同地清除外周Aβ
5.1 引言
5.2 实验部分
5.2.1 试剂
5.2.2 仪器和表
5.2.3 提取红细胞膜
5.2.4 DSPE-PEG-K的合成
5.2.5 EM-K囊泡的合成
5.2.6 CuxO的合成
5.2.7 CuxO@EM-K的合成
5.2.8 CuxO@EM-K的SOD活性测定
5.2.9 CuxO@EM-K的CAT活性测定
5.2.10 CuxO@EM-K的GPx活性测定
5.2.11 免疫荧光实验评估HL-7702细胞对Aβ的摄取
5.2.12 通过ELISA测定细胞内Aβ的含量
5.2.13 加速血液清除现象的评估
5.2.14 CuxO@EM-K的生物安全性
5.2.15 检测血液中和脑内Aβ的水平
5.2.16 莫里斯水迷宫(MWM)实验
5.3 结果与讨论
5.4 本章小结
参考文献
第6章 总结与展望
6.1 总结
6.2 展望
个人简历
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果
本文编号：4034157
【文章页数】：153 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
1.1 阿尔茨海默病简述
1.2 Aβ的产生和清除
1.2.1 Aβ的产生
1.2.2 Aβ的清除
1.3 Aβ纤维化聚集机制
1.4 Aβ聚集体的细胞毒性
1.5 Aβ的靶向治疗
1.5.1 减少Aβ的生成
1.5.2 靶向Aβ的清除
1.6 本论文的研究意义及目的
参考文献
第2章 近红外可控的人工金属酶用于增强Aβ降解
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 试剂
2.2.2 测试和表征
2.2.3 Aβ样品的制备
2.2.4 胰岛素样品的制备
2.2.5 Aβ单体的制备
2.2.6 Aβ纤维的制备
2.2.7 变性Aβ肽的制备
2.2.8 MoS2-PEG的合成
2.2.9 MoS2-PEI的合成
2.2.10 MoS2-Co的合成
2.2.11 MoS2-Co-LVFFA的合成
2.2.12 Aβ聚集体的形貌分析
2.2.13 浊度分析
2.2.14 动态光散射(DLS)测量
2.2.15 十二烷基苯磺酸钠聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)
2.2.16 原子力显微镜(AFM)
2.2.17 基质辅助激光解吸/电离质谱(MALDI-TOF MS)
2.2.18 圆二色(CD)光谱
2.2.19 细胞活力测定
2.2.20 计算方法
2.2.21 模型
2.3 结果与讨论
2.4 本章小结
参考文献
第3章 近红外二区纳米酶用于通过头皮和颅骨减少Aβ沉积
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 试剂
3.2.2 仪器和表征
3.2.3 N-MCNs的合成
3.2.4 Carboxyl-N-MCNs的合成
3.2.5 KD8@N-MCNs的合成
3.2.6 KD8@N-MCNs的光热转化效率
3.2.7 ThT荧光测量
3.2.8 浊度分析
3.2.9 原子力显微镜(AFM)
3.2.10 KD8@N-MCNs的SOD活性测定
3.2.11 KD8@N-MCNs的CAT活性测定
3.2.12 细胞毒性测定
3.2.13 细胞内活性氧(ROS)的检测
3.2.14 KD8@N-MCNs透过血脑屏障的能力
3.2.15 动物模型
3.2.16 离体大脑的近红外荧光成像
3.2.17 KD8@N-MCNs的生物安全性
3.2.18 脑内Aβ的水平
3.2.19 莫里斯水迷宫(MWM)实验
3.3 结果与讨论
3.4 本章小结
参考文献
第4章 近红外靶向增强的外周Aβ清除
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 试剂
4.2.2 仪器与表征
4.2.3 化合物2的制备
4.2.4 化合物3的制备
4.2.5 化合物4的制备
4.2.6 ONA-P分子的制备
4.2.7 上转换纳米粒子(UCNPs)的制备
4.2.8 UCNP@SiO2-NH2的制备
4.2.9 UCNP/ONA-P/K的制备
4.2.10 合成FITC标记的UCNP/ONA-P/K
4.2.11 体外溶血实验
4.2.12 莫里斯水迷宫(MWM)实验
4.2.13 电跳台躲避(step-down)实验
4.2.14 细胞毒性测定
4.2.15 免疫荧光检测肝脏细胞对Aβ的摄取
4.2.16 酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞内Aβ的含量
4.2.17 UCNP/ONA-P/K的生物分布
4.2.18 UCNP/ONA-P/K的药代动力学
4.2.19 免疫组织化学检测3xTg-AD小鼠脑内Aβ的水平
4.3 结果与讨论
4.4 本章小结
参考文献
第5章 自保护的仿生纳米酶用于安全和协同地清除外周Aβ
5.1 引言
5.2 实验部分
5.2.1 试剂
5.2.2 仪器和表
5.2.3 提取红细胞膜
5.2.4 DSPE-PEG-K的合成
5.2.5 EM-K囊泡的合成
5.2.6 CuxO的合成
5.2.7 CuxO@EM-K的合成
5.2.8 CuxO@EM-K的SOD活性测定
5.2.9 CuxO@EM-K的CAT活性测定
5.2.10 CuxO@EM-K的GPx活性测定
5.2.11 免疫荧光实验评估HL-7702细胞对Aβ的摄取
5.2.12 通过ELISA测定细胞内Aβ的含量
5.2.13 加速血液清除现象的评估
5.2.14 CuxO@EM-K的生物安全性
5.2.15 检测血液中和脑内Aβ的水平
5.2.16 莫里斯水迷宫(MWM)实验
5.3 结果与讨论
5.4 本章小结
参考文献
第6章 总结与展望
6.1 总结
6.2 展望
个人简历
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果
本文编号：4034157
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