蜂王浆脂肪酸的抗炎活性及其机制研究

发布时间：2020-07-18 11:07

【摘要】：蜂王浆是一种为人们所熟知的传统保健食品,其组成成分复杂多样,包括水分、蛋白质、碳水化合物、脂类等。蜂王浆有着极高的营养价值和丰富的生理活性,如抗氧化、抑菌、抗炎、神经营养、免疫调节等。游离脂肪酸是蜂王浆的重要功能性组分,但目前关于对蜂王浆脂肪酸的抗炎功效知之甚少。基于本实验室前期在蜂王浆脂肪酸质量控制方面的研究,本研究提取了蜂王浆脂质并用多种分析技术测定了其主要成分;采用体外细胞模型初步比较了蜂王浆冻干粉及其脂提物的抗炎活性;并研究对比了蜂王浆中三种有代表性的脂肪酸单体成分:反式-10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)、10-羟基癸酸(10-HDAA)和癸二酸(SEA)对脂多糖(LPS)和脂磷壁酸(LTA)引起的细胞炎症反应的作用及其机制;最后探索了 10-HDA对LTA诱导的小鼠急性肺炎的保护作用。主要研究结果如下:1.蜂王浆冻干粉和蜂王浆脂质提取物中游离脂肪酸成分的分析利用气相色谱技术和本实验室前期建立的方法对蜂王浆冻干粉中的10-HDA、10-HDAA和SEA的含量进行测定,提取蜂王浆中的脂质后通过液相色谱质谱联用技术和气相色谱质谱联用技术对蜂王浆脂质提取物进行成分分析。结果显示蜂王浆脂质提取物中主要含有10-HDA,10-HDAA和SEA等中链脂肪酸,以及少量十六碳脂肪酸、十八碳脂肪酸等长链脂肪酸。2.蜂王浆与蜂王浆脂质提取物对细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的影响为了初步探究蜂王浆的抗炎活性是否主要来自其脂质成分,比较了蜂王浆与蜂王浆脂提物的抗炎活性,通过测定细胞炎症反应产生的NO释放量和用荧光定量PCR技术分析炎症因子表达量后发现蜂王浆脂质提取物具有良好的抗炎作用。3.10-HDA、10-HDAA和SEA对LPS诱导的细胞炎症反应的作用及其机制使用10-HDA、10-HDAA和SEA处理LPS刺激的RAW264.7细胞,测定其对细胞炎症因子NO,IL-6,IL-10和TNF-α生成的影响;对炎症基因IL-10、iNOS、COX-2和TNF-α等的调控表达;和对炎症MAPK信号通路蛋白JNK、ERK和p38磷酸化的调控以及对NF-κB信号通路蛋白IκBα的调控作用。结果表明,10-HDA、10-HDAA和SEA的预处理均表现出抑制LPS诱导的炎症基因表达和炎症因子产生的作用,但不同脂肪酸的调控程度有所差异;且三种脂肪酸对炎症信号通路蛋白磷酸化均有所调控,展现出蜂王浆脂肪酸成分良好的抗炎潜力。4.10-HDA,10-HDAA和SEA对细菌脂磷壁酸(LTA)诱导小鼠细胞炎症反应的作用及10-HDA对小鼠急性肺炎的保护作用研究了 10-HDA、10-HDAA和SEA对LTA诱导的炎症介质和炎症基因表达的影响,并探索了 10-HDA对急性肺炎模型小鼠血清中炎性细胞因子的分泌、肺部组织病理变化的影响及对MAPK信号通路中关键蛋白(ERK、p38和JNK)的调节作用。结果表明,10-HDA、10-HDAA和SEA对炎性介质IL-6的生成有明显的剂量依赖性抑制作用;且10-HDA和10-HDAA能够降低IL-1β、IL-6、IL-10和COX-2等关键炎症基因的表达;10-HDA对炎症信号通路蛋白ERK、p38和JNK的磷酸化也具有调控作用。此外,10-HDA(100mg/kg)可缓解小鼠肺组织病理学变化,调节血清中LTA引起的炎性细胞因子(IL-10、MCP-1和TNF-α的)释放,从而对LTA引起的小鼠急性肺损伤起到一定程度的保护作用。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS218;S896.3
【图文】：

逑３．２蜂王浆脂质提取物中脂肪酸的ＬＣ－ＭＳ检测结果逡逑如图４．２所示，对蜂王浆脂质提取物样品进行了低分辨率液相色谱质谱联用逡逑分析得到该条件下的蜂王浆脂质提取物的总离子流色谱图。逡逑ｘ１０邋７邋－ＥＳＩ邋ＴＩＣ邋Ｓｃａｎ邋Ｆｒａｇ＝１３５．０Ｖ邋ＣＦ＝０．０００邋ＤＦ＝０．０００邋ＳＡ１．ｄ逡逑２．５－邋１逦１逡逑。：？ｊｖ／Ｖ＾ｗｗＡ＾逡逑０邋＇邋ｔ逦ｔ邋ｔ邋ｔ邋邋逦！邋■邋Ｉ逡逑１邋２邋３邋４邋５邋６邋７邋８邋９邋１０邋１１邋１２邋１３邋１４邋１５邋１６邋１７邋１８邋１９邋２０邋２１邋２２邋２３邋２４邋２５邋２６邋２７邋２８邋２９逡逑Ｃｏｕｎｔｓ邋ｖｓ．邋Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ邋Ｔｉｍｅ邋（ｍｉｎ）逡逑图４．２蜂王浆脂质提取物ＬＣ－ＭＳ总离子流色谱图逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋４．２邋ＬＣ－ＭＳ邋ＥＳＩ邋ＴＩＣ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｒｏｙａｌ邋ｊｅｌｌｙ邋ｌｉｐｉｄｓ邋ｓａｍｐｌｅ逡逑接着根据脂肪酸的荷质比信息（刘善菁等２０１５），得到了蜂王浆脂质提取物逡逑样品中羟基辛酸（８．２８１邋ｍｉｎ）、１０－ＨＤＡ邋（１１．９２１邋ｍｉｎ）、１０－ＨＤＡＡ邋（１２．９６６ｍｉｎ）、逡逑ＳＥＡ邋（邋１２．２５７ｍｉｎ）、２－十二碳烯二酸（１６＿１５１ｍｉｎ）、十二烷二酸（１６．８３８ｍｉｎ）的逡逑独立色谱图，如图４．３所示。逡逑２９逡逑

逦蜂王浆脂肪酸的抗炎活性及其机制研宄逦逡逑ｘ５邋－ＥＳＩ邋ＥＩＣ（邋１５９．０）邋Ｓｃａｎ邋Ｆｒａｇ＝邋１３５．０Ｖ邋ＣＦ＝０．０００邋ＤＦ＝０．０００逡逑

逦浙江大学博士学位论文逦逡逑图４．４为蜂王浆脂质提取物中羟基辛酸、１０－ＨＤＡ、１０－ＨＤＡＡ、ＳＥＡ、２－十二逡逑碳烯二酸、十二烷二酸的质谱图信息的分析结果。逡逑ｘ１０邋３邋－ＳＩ邋Ｓｃａｎ邋（ｉｔ邋７．９９７－８．５３４邋ｍｉｎ．邋７３邋ｓｃａｎｓ）邋Ｆｒａｇ－１３５．０Ｖ邋ＣＦ－０．０００邋ＤＦ－０．０００逦ｘ１０？邋－ＳＩ邋Ｓｃａｎ邋（ｆｔ邋ＩＶＳＩ－ｉ－ｌ２．７７９邋ｍ？ｎ．邋１１７邋ｓｃａｎｓ）邋Ｆｒａｇ？１３５．０Ｖ邋ＣＦ－０．０００邋ＯＦ－Ｏ．ＯＯＯ逡逑

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