牛奶中四环素和青霉素残留物免疫侧向层析检测方法研究
发布时间：2021-03-31 12:53
抗生素自发现至今,一直被广泛应用于医疗领域,可以治疗多种人类和动物疾病,因此在畜牧养殖业中被广泛使用甚至造成抗生素的滥用问题,导致抗生素在牛奶、鸡蛋、猪肉等动物源性食品中的残留问题越来越严重。所以建立快速、便捷、灵敏的抗生素残留检测方法对预防食品安全问题的发生和保护人类健康具有重要意义。因此,本文针对食品中残留危害较为严重的四环素类、青霉素类抗生素,建立了以免疫侧向层析技术为基础的三种快速检测方法:（1）建立四环素传统型免疫层析试纸检测方法基于抗原抗体的特异性免疫识别和毛细侧向层析作用力检测四环素。本实验同时优化了四环素的标记抗体量、K2CO3的添加量、封闭剂种类和金纳米粒子粒径大小等实验条件,在最后优化好的各关键实验参数下,肉眼观察到的四环素检测灵敏度为10 ppb,同时在检测浓度为0.2-10 ppb之间建立的标准曲线的线性关系良好。优化的实验参数对四环素牛奶实际样品的检测也同样适用,不受牛奶基质中复杂成分的影响。（2）建立四环素预孵育增敏型免疫层析试纸检测方法以传统的免疫层析试纸为基础,加以改进,放弃使用金标垫,采用目标物与金标抗体提前...
【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
比色适配体分析法
第一章绪论5电化学适配体传感器是通过电化学信号的变化来监测目标物浓度的分析方法，图1.2所示是一种基于经典的丝网印刷金电极建立电化学适配体传感器检测四环素的方法[58]，其检测原理是通过循环伏特安培法得到电化学信号值，再通过监测电化学信号值的变化与相对应四环素浓度之间的关系实现样品中四环素的定量检测，最低检出限为10nM至微摩尔范围内。图1.2电化学适配体分析法Fig1.1Theelectrochemicalaptasensoranalyticalmethod1.2.4免疫分析法免疫分析法的原理是抗原抗体发生免疫反应后特异性结合，它是在此基础上兴起的一种检测技术。这种检测方法原理简单、检测结果准确、检测灵敏度高、成本低廉，是目前论文报道中应用最为广泛的抗生素残留分析方法。有放射免疫法[59]、酶联免疫吸附法[60-61]、荧光免疫法[62-63]等。放射免疫法是最早使用的免疫分析方法，同时有标记同位素的和没有标记同位素的抗原，两者同时与抗体发生竞争性反应，利用液体闪烁仪检测同位素信号样本中的抗生素浓度的一种免疫分析方法。秦燕[64]等研究建立了CharmⅡ放射免疫系统测定动物血清、尿液和组织中残留的青霉素族抗生素，最低检出限分别为1000μg/L、200μg/L和50μg/kg;进一步检测与其他族抗生素无交叉反应。荧光免疫法是先将荧光纳米材料标记在抗原或抗体表面，然后通过抗原抗体的免疫反应，与其可以识别的抗体或抗原结合后，利用肉眼观察或特定的仪器等来检测目标物的浓度[65]。Barberio[66]等利用荧光免疫法检测牛奶中残留的β-内酰胺类抗生素，实现了0.16μg/kg的残留检测。酶联免疫吸附法（Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)是基于酶催化其底物反应产生有色物质和抗原抗体免疫识别的原理检测待测物的一种方法，具体检测时通过反复洗脱，分
底物反应形成的颜色来定性和定量检测目标物[67]。具体检测步骤是先将抗原或抗体固定在酶标板表面，然后将抗原或抗体通过化学作用与某种酶连接，形成酶标抗原或抗体[68]，然后再向酶标板中加入连接的这种酶的催化反应所需要的底物，由于酶的催化效率极高，所以很快酶标板就会显色，显色强度的深浅决定样品中被检目标物量的多少，最后可根据酶标仪得到酶催化反应底物反应颜色的强度的具体数据，再通过数据建立标准曲线就可以定量分析被测样品的含量。此方法的优势是借助酶催化效率高的优点，极大的提高反应效率，增强灵敏度。图1.3所示是Javier[69]等利用酶联免疫吸附法检测牛奶中的多西环素，检测灵敏度达到0.1ng/ml.图1.3酶联免疫法检测多西环素Figure1.3DCDetectionbyELISA上文详细叙述了一些基于适配体和免疫反应的方法。但这些方法一般都是在实验室内进行，需要严格的反应操作条件或需要借助光学仪器，不适合现场实时检测的开展。如荧光适配体传感器需要对适配体序列进行化学修饰，或需要荧光来源，这些材料难获取并且性质不稳定；化学发光适配体一般反应过程中产生的光信号不稳定，最后导致检测结果不准确；共振散射适配体传感器易受温度、样品成分的影响，检测结果准确度不高；电化学适配体传感器需要繁复的电极修饰和电化学工作站等仪器，要求比较高。放射免疫法的缺点是会产生放射性污染、处理困难、成本高；荧光免疫法实际食品样品检测时背景强，容易对结果造成干扰，且技术程序比较复杂、荧光易淬灭；酶联免疫吸附法需要反复洗板，洗完板还需要长时间的烘板，操作步骤较为繁琐，并且需要借助光学仪器来判读结果，检测过程中干扰因素较多导致重复性不好，以上这些方法的这些缺点导致其应用范围局限于实验室内，不能应用于实时便捷性
【参考文献】：
期刊论文
[1]动物源性食品中抗生素残留的分类及检测方法的研究进展[J]. 吴长青,冯俊,沈浥,张玉柱. 食品安全质量检测学报. 2019(21)
[2]基于表面增强拉曼光谱的养殖水中硝基呋喃类抗生素残留检测[J]. 李静,余婉松,夏苏捷,陈燕,王柯. 食品工业科技. 2019(24)
[3]动物源性食品中氟喹诺酮类抗生素残留检测方法的研究进展[J]. 李妍,闫蕊,王孝研,张宁,顾晓雯. 食品安全质量检测学报. 2019(10)
[4]环境中抗生素的污染现状及危害[J]. 李红燕,陈兴汉. 中国资源综合利用. 2018(05)
[5]食品中抗生素耐药基因研究进展[J]. 唐惠玲,尹鸿萍. 江苏农业科学. 2016(10)
[6]兽用抗生素滥用的危害与合理使用[J]. 梁楠,庞歌. 河南农业. 2016(27)
[7]抗生素耐药基因在畜禽粪便-土壤系统中的分布、扩散及检测方法[J]. 田甜甜,王瑞飞,杨清香. 微生物学通报. 2016(08)
[8]抗生素残留对环境影响的调查研究[J]. 刘高燕. 化工中间体. 2015(01)
[9]免疫层析试纸技术及其在食品安全检测中的应用[J]. 李建武,宋春美,刘芳,吴淑燕,李浩林,刘程,邱实,曾海娟,吴嫚,刘箐. 食品科学. 2014(08)
[10]动物性产品中抗生素残留的原因、危害及检测方法浅析[J]. 张化民,李庆华,肖文刚. 湖北畜牧兽医. 2014(01)
本文编号：3111474
【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
比色适配体分析法
第一章绪论5电化学适配体传感器是通过电化学信号的变化来监测目标物浓度的分析方法，图1.2所示是一种基于经典的丝网印刷金电极建立电化学适配体传感器检测四环素的方法[58]，其检测原理是通过循环伏特安培法得到电化学信号值，再通过监测电化学信号值的变化与相对应四环素浓度之间的关系实现样品中四环素的定量检测，最低检出限为10nM至微摩尔范围内。图1.2电化学适配体分析法Fig1.1Theelectrochemicalaptasensoranalyticalmethod1.2.4免疫分析法免疫分析法的原理是抗原抗体发生免疫反应后特异性结合，它是在此基础上兴起的一种检测技术。这种检测方法原理简单、检测结果准确、检测灵敏度高、成本低廉，是目前论文报道中应用最为广泛的抗生素残留分析方法。有放射免疫法[59]、酶联免疫吸附法[60-61]、荧光免疫法[62-63]等。放射免疫法是最早使用的免疫分析方法，同时有标记同位素的和没有标记同位素的抗原，两者同时与抗体发生竞争性反应，利用液体闪烁仪检测同位素信号样本中的抗生素浓度的一种免疫分析方法。秦燕[64]等研究建立了CharmⅡ放射免疫系统测定动物血清、尿液和组织中残留的青霉素族抗生素，最低检出限分别为1000μg/L、200μg/L和50μg/kg;进一步检测与其他族抗生素无交叉反应。荧光免疫法是先将荧光纳米材料标记在抗原或抗体表面，然后通过抗原抗体的免疫反应，与其可以识别的抗体或抗原结合后，利用肉眼观察或特定的仪器等来检测目标物的浓度[65]。Barberio[66]等利用荧光免疫法检测牛奶中残留的β-内酰胺类抗生素，实现了0.16μg/kg的残留检测。酶联免疫吸附法（Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)是基于酶催化其底物反应产生有色物质和抗原抗体免疫识别的原理检测待测物的一种方法，具体检测时通过反复洗脱，分
底物反应形成的颜色来定性和定量检测目标物[67]。具体检测步骤是先将抗原或抗体固定在酶标板表面，然后将抗原或抗体通过化学作用与某种酶连接，形成酶标抗原或抗体[68]，然后再向酶标板中加入连接的这种酶的催化反应所需要的底物，由于酶的催化效率极高，所以很快酶标板就会显色，显色强度的深浅决定样品中被检目标物量的多少，最后可根据酶标仪得到酶催化反应底物反应颜色的强度的具体数据，再通过数据建立标准曲线就可以定量分析被测样品的含量。此方法的优势是借助酶催化效率高的优点，极大的提高反应效率，增强灵敏度。图1.3所示是Javier[69]等利用酶联免疫吸附法检测牛奶中的多西环素，检测灵敏度达到0.1ng/ml.图1.3酶联免疫法检测多西环素Figure1.3DCDetectionbyELISA上文详细叙述了一些基于适配体和免疫反应的方法。但这些方法一般都是在实验室内进行，需要严格的反应操作条件或需要借助光学仪器，不适合现场实时检测的开展。如荧光适配体传感器需要对适配体序列进行化学修饰，或需要荧光来源，这些材料难获取并且性质不稳定；化学发光适配体一般反应过程中产生的光信号不稳定，最后导致检测结果不准确；共振散射适配体传感器易受温度、样品成分的影响，检测结果准确度不高；电化学适配体传感器需要繁复的电极修饰和电化学工作站等仪器，要求比较高。放射免疫法的缺点是会产生放射性污染、处理困难、成本高；荧光免疫法实际食品样品检测时背景强，容易对结果造成干扰，且技术程序比较复杂、荧光易淬灭；酶联免疫吸附法需要反复洗板，洗完板还需要长时间的烘板，操作步骤较为繁琐，并且需要借助光学仪器来判读结果，检测过程中干扰因素较多导致重复性不好，以上这些方法的这些缺点导致其应用范围局限于实验室内，不能应用于实时便捷性
【参考文献】：
期刊论文
[1]动物源性食品中抗生素残留的分类及检测方法的研究进展[J]. 吴长青,冯俊,沈浥,张玉柱. 食品安全质量检测学报. 2019(21)
[2]基于表面增强拉曼光谱的养殖水中硝基呋喃类抗生素残留检测[J]. 李静,余婉松,夏苏捷,陈燕,王柯. 食品工业科技. 2019(24)
[3]动物源性食品中氟喹诺酮类抗生素残留检测方法的研究进展[J]. 李妍,闫蕊,王孝研,张宁,顾晓雯. 食品安全质量检测学报. 2019(10)
[4]环境中抗生素的污染现状及危害[J]. 李红燕,陈兴汉. 中国资源综合利用. 2018(05)
[5]食品中抗生素耐药基因研究进展[J]. 唐惠玲,尹鸿萍. 江苏农业科学. 2016(10)
[6]兽用抗生素滥用的危害与合理使用[J]. 梁楠,庞歌. 河南农业. 2016(27)
[7]抗生素耐药基因在畜禽粪便-土壤系统中的分布、扩散及检测方法[J]. 田甜甜,王瑞飞,杨清香. 微生物学通报. 2016(08)
[8]抗生素残留对环境影响的调查研究[J]. 刘高燕. 化工中间体. 2015(01)
[9]免疫层析试纸技术及其在食品安全检测中的应用[J]. 李建武,宋春美,刘芳,吴淑燕,李浩林,刘程,邱实,曾海娟,吴嫚,刘箐. 食品科学. 2014(08)
[10]动物性产品中抗生素残留的原因、危害及检测方法浅析[J]. 张化民,李庆华,肖文刚. 湖北畜牧兽医. 2014(01)
本文编号：3111474
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/qgylw/3111474.html
