鳕鱼皮胶原蛋白肽的抗皮肤光老化功效及其作用机制研究
发布时间：2021-04-04 20:59
随着生活水平的提高,人们对美的追求也越来越高,皮肤光老化问题也日益受到人们的广泛关注。胶原蛋白肽被广泛认可具有改善皮肤光老化的功效,但是目前主要集中于胶原蛋白酶解物的活性评价以及胶原蛋白肽的分离鉴定,但是关于胶原蛋白肽的高效筛选以及定向制备方面的研究较少。因此,本课题以深海鳕鱼皮为原料,以光损伤的成纤维细胞为模型,考察不同条件下酶解制备的胶原蛋白肽的抗皮肤光老化活性差异,并结合肽组学和peptide ranker等分析软件,快速筛选出潜在具有抗光老化活性的胶原蛋白多肽,在此基础上探究其保护成纤维细胞光损伤的作用机理,最后确定了定向制备高含量活性肽的鳕鱼皮胶原蛋白肽的酶解工艺。本课题主要结果和结论如下:（1）分别采用酸性、中性、碱性蛋白酶制备不同水解度的鳕鱼皮酶解物,对比分析了它们的蛋白质回收率、水解度以及光损伤成纤维细胞的修复活性,结果发现碱性蛋白酶酶解5 h下的鳕鱼皮酶解液水解效果最佳,其回收率和水解度达85.6%和20.55%;胶原酶抑制活性和光损伤成纤维细胞的细胞存活率也均为最高,分别为66.99%、73.56%,并且3种蛋白酶制备的酶解液的酶解效率和抗光老化活性都随着酶解时间的...
【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
皮肤结构
第二章抗光老化的胶原蛋白肽的制备及其鉴定筛选31行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）方法，对胰蛋白酶消化的样品的UPLC-MS数据进行主成分分析（PCA）以对这五种明胶进行分类，结合主成分分析（PCA），鉴定了阿胶，牛皮明胶，猪-隐形明胶，龟甲胶和鹿角胶的特征性的肽生物标志物。Gallego等人[144]也通过过纳米液相色谱与串联质谱联用方法，再结合主成分分析（PCA），使用无标记方法对所有样品中共有67种显示蛋氨酸，脯氨酸和色氨酸氧化的肽进行了共同鉴定，显示出了加工9个月的西班牙干腌火腿期间氧化肽的演变过程。本文用PCA分析手段，目的是快速分析出不同酶解条件下的鳕鱼皮酶解产物的差异肽和共性肽的情况。为了进一步明确造成不同酶解条件下鳕鱼皮酶解液的抗光老化活性差异的肽组成方面的原因，进而快速筛选潜在的具有抗光老化活性的胶原蛋白多肽序列。首先，分析所有9个酶解产物进行的分子特征峰PCA结果，由图2-6可知，不同种酶作用的酶解产物相互离散，结果表明不同酶作用的酶解产物的肽段存在明显的差异，同一种酶而不同酶解时间作用的酶解产物肽段相互聚集说明它们之前存在一定的共性。注：PC1为第一主成分，PC2为第二主成分。图2-6不同酶解条件下鳕鱼皮酶解液的物分子特征峰PCA分析Fig.2-6PCAanalysisofmolecularcharacteristicpeaksofenzymolysissolutionofcodskinunderdifferentenzymatichydrolysisconditions为了进一步分析，研究了3个Alcalase碱性蛋白酶（酶解1、3、5h）下的酶解产物进行的PCA分析结果，由图2-7可知同种酶不同水解度的酶解产物肽段相互聚集说明它们之前存在一定的共性。
华南理工大学硕士学位论文32注：PC1是第一主成分，PC2为第二主成分图2-7不同酶解时间的碱性蛋白酶的鳕鱼皮酶解产物的分子特征峰PCA分析Fig.2-7PCAAnalysisofMolecularCharacteristicPeaksofCodSkinDigestionProductsofAlkalineProteasewithDifferentDigestionTime这一结果与前面其肽指纹图谱的结果相吻合，不同酶解时间作用的酶解产物肽段相互聚集说明它们之前存在一定的共性，同种酶不同水解度的酶解产物肽段相互聚集说明它们之前存在一定的共性。2.3.9同种Alcalase碱性蛋白酶不同水解度的酶解产物共性肽段的鉴定和筛选基于指纹图谱和PCA分析结果，通过质谱分离鉴定，找到了84种其酶解产物中都存在的共性肽段，再基于<1500Da的小分子肽才具有较好的吸收利用度，因而进一步筛选出78种小分子共性肽段，如下表2-5所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]酶解罗非鱼肉制备抗凝血活性肽[J]. 张泽,陈踊南,杨萍,陈旖,李丽仪. 食品工业. 2019(09)
[2]鲢鱼鱼鳞抗氧化活性肽的酶法制备工艺研究[J]. 杨诗宇,李明华. 广州化工. 2019(14)
[3]皮肤角质形成细胞光老化模型的构建及老化机制的初步研究[J]. 刘川,黄欣,王萍,潘芸,曹迪,刘依依,陈爱军. 第三军医大学学报. 2019(17)
[4]基于Caco-2细胞模型评价鳕鱼源钙、铁螯合肽促钙、铁转运吸收特性[J]. 杜芬,侯虎,姜丹丹,吴汶飞,李八方. 中国食品学报. 2018(04)
[5]鳕鱼皮寡肽对人胃癌细胞SGC-7901增殖凋亡的影响及机制[J]. 吴丽萍,续力云,胡晓斐,张国强. 解剖学报. 2017(06)
[6]鳕鱼皮胶原蛋白肽制备及其对肝细胞损伤的保护作用[J]. 滕芳芳,胡晓斐,刘晨晨,杨最素,黄芳芳,丁国芳. 中国食品学报. 2017(08)
[7]鳕鱼皮明胶-Ca2+复配止血粉的止血活性研究[J]. 姚迪,孙蕾蕾,刘晗,侯虎,李八方. 食品工业科技. 2017(14)
[8]Characterization of Angiotensin-? Converting Enzyme Inhibiting Peptide from Venerupis philippinarum with Nano-Liquid Chromatography in Combination with Orbitrap Mass Spectrum Detection and Molecular Docking[J]. SHI Lei,WU Tizhi,SHENG Naijuan,YANG Li,WANG Qian,LIU Rui,WU Hao. Journal of Ocean University of China. 2017(03)
[9]三文鱼小清蛋白定向酶解模型及致敏活性分析[J]. 马涛,张海欣,马永庆,谷瑞增,蔡木易,鲁军. 食品工业. 2017(02)
[10]水解进程对酶法制备的鱼鳞胶原蛋白肽性能的影响[J]. 胡杨,杨莉莉,熊善柏,刘友明,尤娟,尹涛. 华中农业大学学报. 2017(01)
博士论文
[1]弹性蛋白肽的抗皮肤光老化功效及其作用机制研究[D]. 刘洋.华南理工大学 2019
[2]凤尾鱼肽对东莨菪碱诱导的小鼠记忆损伤的改善作用及其机理探究[D]. 赵甜甜.华南理工大学 2018
[3]抗氧化肽的构效关系及定向制备的研究[D]. 郑淋.华南理工大学 2015
[4]海参胶原蛋白生化性质及胶原肽活性研究[D]. 崔凤霞.中国海洋大学 2007
硕士论文
[1]酱油鲜味肽的分离鉴定及其定向酶解制备研究[D]. 赵炫.华南理工大学 2019
[2]皮肤光老化机制研究—紫外线照射对成纤维细胞染色体端粒DNA复制的影响[D]. 马慧敏.第四军医大学 2009
[3]定向酶解大豆蛋白及其ACE抑制肽研究[D]. 常玮.江南大学 2008
[4]日本刺参胶原蛋白多肽和鱿鱼皮胶原蛋白多肽护肤活性的研究[D]. 王奕.中国海洋大学 2007
本文编号：3118480
【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
皮肤结构
第二章抗光老化的胶原蛋白肽的制备及其鉴定筛选31行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）方法，对胰蛋白酶消化的样品的UPLC-MS数据进行主成分分析（PCA）以对这五种明胶进行分类，结合主成分分析（PCA），鉴定了阿胶，牛皮明胶，猪-隐形明胶，龟甲胶和鹿角胶的特征性的肽生物标志物。Gallego等人[144]也通过过纳米液相色谱与串联质谱联用方法，再结合主成分分析（PCA），使用无标记方法对所有样品中共有67种显示蛋氨酸，脯氨酸和色氨酸氧化的肽进行了共同鉴定，显示出了加工9个月的西班牙干腌火腿期间氧化肽的演变过程。本文用PCA分析手段，目的是快速分析出不同酶解条件下的鳕鱼皮酶解产物的差异肽和共性肽的情况。为了进一步明确造成不同酶解条件下鳕鱼皮酶解液的抗光老化活性差异的肽组成方面的原因，进而快速筛选潜在的具有抗光老化活性的胶原蛋白多肽序列。首先，分析所有9个酶解产物进行的分子特征峰PCA结果，由图2-6可知，不同种酶作用的酶解产物相互离散，结果表明不同酶作用的酶解产物的肽段存在明显的差异，同一种酶而不同酶解时间作用的酶解产物肽段相互聚集说明它们之前存在一定的共性。注：PC1为第一主成分，PC2为第二主成分。图2-6不同酶解条件下鳕鱼皮酶解液的物分子特征峰PCA分析Fig.2-6PCAanalysisofmolecularcharacteristicpeaksofenzymolysissolutionofcodskinunderdifferentenzymatichydrolysisconditions为了进一步分析，研究了3个Alcalase碱性蛋白酶（酶解1、3、5h）下的酶解产物进行的PCA分析结果，由图2-7可知同种酶不同水解度的酶解产物肽段相互聚集说明它们之前存在一定的共性。
华南理工大学硕士学位论文32注：PC1是第一主成分，PC2为第二主成分图2-7不同酶解时间的碱性蛋白酶的鳕鱼皮酶解产物的分子特征峰PCA分析Fig.2-7PCAAnalysisofMolecularCharacteristicPeaksofCodSkinDigestionProductsofAlkalineProteasewithDifferentDigestionTime这一结果与前面其肽指纹图谱的结果相吻合，不同酶解时间作用的酶解产物肽段相互聚集说明它们之前存在一定的共性，同种酶不同水解度的酶解产物肽段相互聚集说明它们之前存在一定的共性。2.3.9同种Alcalase碱性蛋白酶不同水解度的酶解产物共性肽段的鉴定和筛选基于指纹图谱和PCA分析结果，通过质谱分离鉴定，找到了84种其酶解产物中都存在的共性肽段，再基于<1500Da的小分子肽才具有较好的吸收利用度，因而进一步筛选出78种小分子共性肽段，如下表2-5所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]酶解罗非鱼肉制备抗凝血活性肽[J]. 张泽,陈踊南,杨萍,陈旖,李丽仪. 食品工业. 2019(09)
[2]鲢鱼鱼鳞抗氧化活性肽的酶法制备工艺研究[J]. 杨诗宇,李明华. 广州化工. 2019(14)
[3]皮肤角质形成细胞光老化模型的构建及老化机制的初步研究[J]. 刘川,黄欣,王萍,潘芸,曹迪,刘依依,陈爱军. 第三军医大学学报. 2019(17)
[4]基于Caco-2细胞模型评价鳕鱼源钙、铁螯合肽促钙、铁转运吸收特性[J]. 杜芬,侯虎,姜丹丹,吴汶飞,李八方. 中国食品学报. 2018(04)
[5]鳕鱼皮寡肽对人胃癌细胞SGC-7901增殖凋亡的影响及机制[J]. 吴丽萍,续力云,胡晓斐,张国强. 解剖学报. 2017(06)
[6]鳕鱼皮胶原蛋白肽制备及其对肝细胞损伤的保护作用[J]. 滕芳芳,胡晓斐,刘晨晨,杨最素,黄芳芳,丁国芳. 中国食品学报. 2017(08)
[7]鳕鱼皮明胶-Ca2+复配止血粉的止血活性研究[J]. 姚迪,孙蕾蕾,刘晗,侯虎,李八方. 食品工业科技. 2017(14)
[8]Characterization of Angiotensin-? Converting Enzyme Inhibiting Peptide from Venerupis philippinarum with Nano-Liquid Chromatography in Combination with Orbitrap Mass Spectrum Detection and Molecular Docking[J]. SHI Lei,WU Tizhi,SHENG Naijuan,YANG Li,WANG Qian,LIU Rui,WU Hao. Journal of Ocean University of China. 2017(03)
[9]三文鱼小清蛋白定向酶解模型及致敏活性分析[J]. 马涛,张海欣,马永庆,谷瑞增,蔡木易,鲁军. 食品工业. 2017(02)
[10]水解进程对酶法制备的鱼鳞胶原蛋白肽性能的影响[J]. 胡杨,杨莉莉,熊善柏,刘友明,尤娟,尹涛. 华中农业大学学报. 2017(01)
博士论文
[1]弹性蛋白肽的抗皮肤光老化功效及其作用机制研究[D]. 刘洋.华南理工大学 2019
[2]凤尾鱼肽对东莨菪碱诱导的小鼠记忆损伤的改善作用及其机理探究[D]. 赵甜甜.华南理工大学 2018
[3]抗氧化肽的构效关系及定向制备的研究[D]. 郑淋.华南理工大学 2015
[4]海参胶原蛋白生化性质及胶原肽活性研究[D]. 崔凤霞.中国海洋大学 2007
硕士论文
[1]酱油鲜味肽的分离鉴定及其定向酶解制备研究[D]. 赵炫.华南理工大学 2019
[2]皮肤光老化机制研究—紫外线照射对成纤维细胞染色体端粒DNA复制的影响[D]. 马慧敏.第四军医大学 2009
[3]定向酶解大豆蛋白及其ACE抑制肽研究[D]. 常玮.江南大学 2008
[4]日本刺参胶原蛋白多肽和鱿鱼皮胶原蛋白多肽护肤活性的研究[D]. 王奕.中国海洋大学 2007
本文编号：3118480
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