绿原酸对猕猴桃和樱桃番茄采后病原菌抑制作用及机理研究
发布时间：2021-11-03 06:25
软腐病和酸腐病分别是猕猴桃和樱桃番茄常见的采后真菌病害,本研究从自然发病的红阳猕猴桃和樱桃番茄上分离出病原菌并进行回接验证,通过形态学鉴定和分子生物学手段,最终确定从红阳猕猴桃和樱桃番茄分离出的病原菌分别是拟茎点霉Diaporthe phaseolorum和白地霉Geotrichum candidum。课题组已有病原菌株灰霉Botrytis cinerea同样是常见的樱桃番茄酸腐病病原真菌。因此找到合适的抑菌剂加强对这三种病原菌的抑制,对于减少猕猴桃和番茄的采后病害、促进相关产业的健康发展十分重要。绿原酸是一种从天然植物中提取出的广谱抗真菌抑菌剂,在果蔬保鲜、食品防腐、医药治疗等领域有广泛的应用,具有重要的研究价值和应用前景。在体外试验中,发现绿原酸能够抑制病原菌在培养基上的生长情况、降低其孢子萌发率和萌发后芽管长度,且上述抑制作用与剂量明显相关。此外绿原酸还可以促进病原菌产孢,说明病原菌遭遇逆境胁迫。此外还初步探究了抑制作用机理,研究发现绿原酸能显著抑制病原菌菌丝的活力,促进线粒体超氧化物的积累、提高细胞内Ca2+浓度,降低线粒体膜电位、降低其ATP含量,并能促...
【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
研究技术路线图
第四章实验结果33第四章实验结果4.1病原菌的鉴定与生物学特性研究4.1.1病原菌的分离纯化经过PDA培养基纯培养，从自然发病的红阳猕猴桃和樱桃番茄中分别得到真菌菌株1种。如图4.1所示，将分离所得的病原菌菌株分别接种至健康的猕猴桃和千禧番茄上，3-5天时均可见接种部位有明显的病斑，且逐渐向外扩展，发病特征与自然发病的果实相一致。图4.1自然发病水果及回接发病情况Fig.4.1Naturaldiseasefruitsandpathogensinoculation再次从发病的水果上分离病原菌，经过PDA培养基再次纯培养，分离得到的病原菌菌落形态与第一次分离得到的病原菌菌落形态相一致。根据科赫法则，可认定分离得到的两种病原菌分别是猕猴桃软腐病和樱桃番茄酸腐病的病原菌。4.1.2病原菌的形态学鉴定如图4.2A，从猕猴桃上分离所得真菌在PDA培养基上培养后菌落呈圆形，菌丝为白色棉状，菌落较为平坦，菌丝生长较为致密；培养1个月附近，可见菌落上有黑色分生孢子器，其上可见乳白色或乳黄色油滴状液体，挑取少量液体并稀释于300μL无菌水后在光学显微镜下观察，可见该菌产生两种分生孢子，甲型（α）孢子呈纺锤形、无色透明、孢子两侧含两个油球；乙型（β）孢子呈弯钩或直线形、无色且孢子两侧不含油球。其生物学形态符合拟茎点霉有性态的基本特征[82]。如图4.2B，从樱桃番茄上分离所得真菌在PDA培养基上培养后菌落呈圆形，菌丝为白色绒毛状或粉状，菌落较为平坦，菌落厚度适中偏厚，部分培养基上中心略微突起；显微镜观察，该菌菌丝无色透明，易分叉分支，部分菌丝有隔膜，可观察到该菌易于通过裂殖的方式产生大量节孢子，其孢子无色透明，外形为椭圆形或长筒形，部分孢子末端稍平或圆钝，孢子大小约为(2~5)μm×(5~15)μm。
合肥工业大学学历硕士研究生学位论文34其生物学形态符合地霉属真菌的基本形态特征[82]。图4.2病原菌形态学特征Fig.4.2Morphologicalcharacteristicsofpathogens(Bar=10μm)4.1.3病原菌的分子生物学鉴定图4.3病原菌分子生物学进化树Fig.4.3Biologicalevolutionarytreeofpathogenicfungi将测序结果在美国国家生物信息中心(NCBI)上进行比对，由图4.3a可知，从红阳猕猴桃上分离所得菌株为拟茎点霉（Diaporthe），通过分析进化树，可以得知该菌株与拟茎点霉Diaporthephaseolorum有99%的亲缘相似率，且同该属内其他种亲缘较远。结合形态学分析结果可以鉴定该菌株为半知菌亚门、腔孢纲、球壳孢目、间座壳科、间座壳属真菌拟茎点霉Diaporthephaseolorum。将测序结果在NCBI上进行比对，由图4.3b可知，从樱桃番茄上分离所得真菌为白地霉（Geotrichum），通过分析进化树，可以得知该菌株与白地霉Geotrichumcandidum有99%的亲缘相似率，且同该属内其他种亲缘较远。结合形态学分析结果可以鉴定该菌株为半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、丛梗孢科、地霉属真菌白地霉Geotrichumcandidum。
【参考文献】：
期刊论文
[1]T-2毒素对TM3细胞线粒体功能的影响[J]. 黄优,文银容,杨成林,徐泽河,郭江鹏,邬静. 中兽医医药杂志. 2019(06)
[2]低分子量壳聚糖对猕猴桃灰霉病的抑制作用[J]. 王晓芙,曹来福,张丹凤,刘永胜. 合肥工业大学学报(自然科学版). 2019(11)
[3]蒲公英中绿原酸酶法提取工艺及其对圣女果保鲜效果研究[J]. 王轩,包飞,陈旭. 农产品加工. 2019(20)
[4]建阳桔柚两种真菌病原菌的鉴定[J]. 葛慈斌,黄素芳,阮传清,肖荣凤,刘韬. 福建农业学报. 2019(08)
[5]库尔勒香梨黑头病病原菌的分离鉴定[J]. 欧阳辉,张伟达,程少波,陈国刚,江英. 江苏农业科学. 2019(14)
[6]晚期氧化蛋白产物对小肠上皮细胞线粒体膜电位的影响[J]. 谢芳,石洁,白岚. 现代消化及介入诊疗. 2019(07)
[7]黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的腹膜间皮细胞线粒体损伤的干预机制研究[J]. 李正红,史俊,赵君谊,张露,高坤,盛梅笑. 南京中医药大学学报. 2019(04)
[8]1株大蒜内生真菌的分离鉴定及抗病原真菌活性[J]. 范飞,李乐溪,鞠秀云,苏奕人,蒋继宏,杨绪勤. 江苏农业科学. 2019(09)
[9]绿原酸对人胶质瘤细胞U251的抗肿瘤活性及其促凋亡机制[J]. 周佳彬,陈俊,刘臣,靳峰. 肿瘤防治研究. 2019(05)
[10]芦笋茎枯病及其防治技术[J]. 倪兰庭. 新农业. 2019(09)
硕士论文
[1]姜黄素对猕猴桃灰霉病抑制作用机理研究[D]. 花晨艳.合肥工业大学 2019
[2]姜黄素的抗氧化性及对猕猴桃病原菌抑菌效果研究[D]. 王晓芙.合肥工业大学 2018
[3]壳聚糖抑制樱桃番茄采后灰霉病和青霉病及分子机理研究[D]. 汪宏涛.合肥工业大学 2017
[4]姜黄素保鲜剂对采后马水桔保鲜效果的研究及应用[D]. 司徒满泉.仲恺农业工程学院 2014
本文编号：3473222
【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
研究技术路线图
第四章实验结果33第四章实验结果4.1病原菌的鉴定与生物学特性研究4.1.1病原菌的分离纯化经过PDA培养基纯培养，从自然发病的红阳猕猴桃和樱桃番茄中分别得到真菌菌株1种。如图4.1所示，将分离所得的病原菌菌株分别接种至健康的猕猴桃和千禧番茄上，3-5天时均可见接种部位有明显的病斑，且逐渐向外扩展，发病特征与自然发病的果实相一致。图4.1自然发病水果及回接发病情况Fig.4.1Naturaldiseasefruitsandpathogensinoculation再次从发病的水果上分离病原菌，经过PDA培养基再次纯培养，分离得到的病原菌菌落形态与第一次分离得到的病原菌菌落形态相一致。根据科赫法则，可认定分离得到的两种病原菌分别是猕猴桃软腐病和樱桃番茄酸腐病的病原菌。4.1.2病原菌的形态学鉴定如图4.2A，从猕猴桃上分离所得真菌在PDA培养基上培养后菌落呈圆形，菌丝为白色棉状，菌落较为平坦，菌丝生长较为致密；培养1个月附近，可见菌落上有黑色分生孢子器，其上可见乳白色或乳黄色油滴状液体，挑取少量液体并稀释于300μL无菌水后在光学显微镜下观察，可见该菌产生两种分生孢子，甲型（α）孢子呈纺锤形、无色透明、孢子两侧含两个油球；乙型（β）孢子呈弯钩或直线形、无色且孢子两侧不含油球。其生物学形态符合拟茎点霉有性态的基本特征[82]。如图4.2B，从樱桃番茄上分离所得真菌在PDA培养基上培养后菌落呈圆形，菌丝为白色绒毛状或粉状，菌落较为平坦，菌落厚度适中偏厚，部分培养基上中心略微突起；显微镜观察，该菌菌丝无色透明，易分叉分支，部分菌丝有隔膜，可观察到该菌易于通过裂殖的方式产生大量节孢子，其孢子无色透明，外形为椭圆形或长筒形，部分孢子末端稍平或圆钝，孢子大小约为(2~5)μm×(5~15)μm。
合肥工业大学学历硕士研究生学位论文34其生物学形态符合地霉属真菌的基本形态特征[82]。图4.2病原菌形态学特征Fig.4.2Morphologicalcharacteristicsofpathogens(Bar=10μm)4.1.3病原菌的分子生物学鉴定图4.3病原菌分子生物学进化树Fig.4.3Biologicalevolutionarytreeofpathogenicfungi将测序结果在美国国家生物信息中心(NCBI)上进行比对，由图4.3a可知，从红阳猕猴桃上分离所得菌株为拟茎点霉（Diaporthe），通过分析进化树，可以得知该菌株与拟茎点霉Diaporthephaseolorum有99%的亲缘相似率，且同该属内其他种亲缘较远。结合形态学分析结果可以鉴定该菌株为半知菌亚门、腔孢纲、球壳孢目、间座壳科、间座壳属真菌拟茎点霉Diaporthephaseolorum。将测序结果在NCBI上进行比对，由图4.3b可知，从樱桃番茄上分离所得真菌为白地霉（Geotrichum），通过分析进化树，可以得知该菌株与白地霉Geotrichumcandidum有99%的亲缘相似率，且同该属内其他种亲缘较远。结合形态学分析结果可以鉴定该菌株为半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、丛梗孢科、地霉属真菌白地霉Geotrichumcandidum。
【参考文献】：
期刊论文
[1]T-2毒素对TM3细胞线粒体功能的影响[J]. 黄优,文银容,杨成林,徐泽河,郭江鹏,邬静. 中兽医医药杂志. 2019(06)
[2]低分子量壳聚糖对猕猴桃灰霉病的抑制作用[J]. 王晓芙,曹来福,张丹凤,刘永胜. 合肥工业大学学报(自然科学版). 2019(11)
[3]蒲公英中绿原酸酶法提取工艺及其对圣女果保鲜效果研究[J]. 王轩,包飞,陈旭. 农产品加工. 2019(20)
[4]建阳桔柚两种真菌病原菌的鉴定[J]. 葛慈斌,黄素芳,阮传清,肖荣凤,刘韬. 福建农业学报. 2019(08)
[5]库尔勒香梨黑头病病原菌的分离鉴定[J]. 欧阳辉,张伟达,程少波,陈国刚,江英. 江苏农业科学. 2019(14)
[6]晚期氧化蛋白产物对小肠上皮细胞线粒体膜电位的影响[J]. 谢芳,石洁,白岚. 现代消化及介入诊疗. 2019(07)
[7]黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的腹膜间皮细胞线粒体损伤的干预机制研究[J]. 李正红,史俊,赵君谊,张露,高坤,盛梅笑. 南京中医药大学学报. 2019(04)
[8]1株大蒜内生真菌的分离鉴定及抗病原真菌活性[J]. 范飞,李乐溪,鞠秀云,苏奕人,蒋继宏,杨绪勤. 江苏农业科学. 2019(09)
[9]绿原酸对人胶质瘤细胞U251的抗肿瘤活性及其促凋亡机制[J]. 周佳彬,陈俊,刘臣,靳峰. 肿瘤防治研究. 2019(05)
[10]芦笋茎枯病及其防治技术[J]. 倪兰庭. 新农业. 2019(09)
硕士论文
[1]姜黄素对猕猴桃灰霉病抑制作用机理研究[D]. 花晨艳.合肥工业大学 2019
[2]姜黄素的抗氧化性及对猕猴桃病原菌抑菌效果研究[D]. 王晓芙.合肥工业大学 2018
[3]壳聚糖抑制樱桃番茄采后灰霉病和青霉病及分子机理研究[D]. 汪宏涛.合肥工业大学 2017
[4]姜黄素保鲜剂对采后马水桔保鲜效果的研究及应用[D]. 司徒满泉.仲恺农业工程学院 2014
本文编号：3473222
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