基于HAND系统15种食源性致病菌多重实时PCR检测方法的建立

发布时间：2023-04-17 04:05

　　近年来,食源性疾病的发病率居高不下,在全世界范围内都是一个日益严重的公共卫生问题。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)统计显示由病原微生物引起的食源性疾病比例达50%以上,因此急需建立一种有效的食源性致病菌检测方法。传统的食源性病原体检测和鉴定方法费时费力,不足以满足食品快速检测的要求。为阻止疾病的传播、监控食品的卫生安全,保障人民的安全,急需建立一种快速、简单和有效的检测技术。本文将肠粘附性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、假结核耶尔森菌、结肠弯曲菌、空肠弯曲菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、肠炎沙门氏菌、类志贺邻单胞菌、嗜水气单胞菌和福氏志贺氏菌为模式菌株,建立一种快速检测15种食源性致病菌的多重实时PCR技术。主要研究结果如下:(1)通过HAND系统建立了一种能够同时检测15种食源性致病菌多重实时PCR方法,具有特异性高、灵敏度好、重复性和稳定性高等特点,并且适用于复杂样本的检测;(2)通过玻璃化技术,将多重实时PCR中热不稳定成分(Taq酶、dNTP、染料和引物)玻璃化到PCR管...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第1章 绪论
    1.1 食源性致病菌
    1.2 病原微生物常用鉴别方法
        1.2.1 传统培养法
        1.2.2 传统培养法的优化
        1.2.3 免疫学检测
        1.2.4 核酸检测
    1.3 研究目的及意义
    1.4 技术路线
第2章 基于HAND系统食源性致病菌实时PCR检测技术的建立
    2.1 材料与设备
        2.1.1 菌株及来源
        2.1.2 培养基和试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 试验方法
        2.2.1 菌株的培养和模板DNA的制备
        2.2.2 靶序列与引物
        2.2.3 单重荧光定量PCR体系的建立
        2.2.4 单重实时PCR的特异性
        2.2.5 单重实时PCR的敏感性
        2.2.6 单重实时PCR的重复性和稳定性
        2.2.7 多重实时PCR体系的建立
        2.2.8 多重时候PCR的特异性
        2.2.9 多重实时PCR的敏感性
        2.2.10 多重实时PCR的重复性和稳定性
    2.3 结果与分析
        2.3.1 单重荧光定量PCR体系的建立
        2.3.2 单重荧光定量PCR特异性结果
        2.3.3 单重实时PCR敏感性结果
        2.3.4 单重实时PCR重复性和稳定性结果
        2.3.5 多重实时PCR体系的建立
        2.3.6 多重荧光定量PCR特异性结果
        2.3.7 多重荧光定量PCR敏感性结果
        2.3.8 多重荧光定量PCR重复性和稳定性结果
    2.4 本章小结
第3章 多重实时PCR体系的玻璃化
    3.1 材料与设备
        3.1.1 菌株及来源
        3.1.2 培养基和试剂
        3.1.3 主要仪器
    3.2 试验方法
        3.2.1 菌株的培养和模板DNA的制备
        3.2.2 反应体系的玻璃化
        3.2.3 玻璃化试剂稳定性
    3.3 结果
        3.3.1 反应体系的玻璃化
        3.3.2 玻璃化试剂稳定性
    3.4 本章小结
第4章 复杂样本的快速提取
    4.1 材料与方法
        4.1.1 菌株及来源
        4.1.2 培养基与试剂
        4.1.3 主要仪器
    4.2 复杂样本快速提取方法
        4.2.1 食品模拟样本
        4.2.2 粪便模拟标本
    4.3 结果
    4.4 本章小结
结论
展望
创新点
致谢
参考文献
作者简介
攻读硕士学位期间发表的论文和科研成果



本文编号：3792530