燕麦生物碱B与β-乳球蛋白复合物对IgE介导的嗜碱性粒细胞脱颗粒的影响

发布时间：2023-10-15 16:13

　　食品组分的相互作用是食品领域重要科学问题,引起了广泛的关注。燕麦牛奶由于含有丰富的营养价值,越来越受到人们的喜爱,其中的组分不可避免会发生相互作用,它们对食物营养品质和安全性的影响尚未有研究报道。燕麦生物碱B和β-乳球蛋白分别为燕麦和牛奶中重要的物质成分,这两成分之间是否会发生相互作用,对彼此的生理活性是否会产生影响是本研究的重点。本论文研究选取燕麦生物碱B和牛乳中β-乳球蛋白为研究对象,主要研究内容为通过紫外吸收光谱和荧光光谱研究二者之间的相互作用,并通过RBL-2H3细胞脱颗粒模型,探究β-乳球蛋白对燕麦生物碱B抑制细胞脱颗粒的影响,以及通过KU812细胞脱颗粒模型,探究燕麦生物碱B与β-乳球蛋白复合物对细胞脱颗粒的影响。主要研究结果如下:(1)通过紫外吸收光谱和荧光吸收光谱实验结果表明,燕麦生物碱B以静态猝灭的方式引起β-乳球蛋白的荧光猝灭,静态猝灭机制条件下,计算得出结合位点数n位于0.5附近,说明燕麦生物碱B与β-乳球蛋白以2:1的比例形成复合物。(2)120μM燕麦生物碱B、60μM、120μM、240μM的β-乳球蛋白和按照浓度比0.5∶1、1∶1、2∶1形成的复合物作用...

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摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 燕麦生物碱的组成
        1.1.1 燕麦生物碱的分类
        1.1.2 燕麦生物碱的结构
    1.2 燕麦生物碱的生理活性
        1.2.1 抗氧化作用
        1.2.2 抗炎作用
        1.2.3 抑制细胞增殖活性
    1.3 牛乳蛋白的结构
        1.3.1 牛乳蛋白的种类
        1.3.2 酪蛋白结构
        1.3.3 乳清蛋白结构
    1.4 小分子化合物与蛋白质相互作用的研究方法
        1.4.1 光谱法
        1.4.2 质谱法
        1.4.3 分子模拟对接技术
    1.5 生物碱与蛋白质相互作用研究现状
        1.5.1 喹啉类生物碱与蛋白质相互作用
        1.5.2 吲哚类生物碱与蛋白质的相互作用
        1.5.3 吡啶类生物碱与蛋白质相互作用
        1.5.4 哌啶类生物碱与蛋白质相互作用
    1.6 肥大细胞
        1.6.1 引发肥大细胞脱颗粒作用的机制
        1.6.2 IgE/FcεRI介导的肥大细胞脱颗粒活性物质
        1.6.3 IgE/FcεRI介导肥大细胞脱颗粒的信号通路
    1.7 立体背景与研究内容
        1.7.1 立题背景
        1.7.2 研究内容
第2章 燕麦生物碱B与β-乳球蛋白相互作用的研究
    2.1 引言
    2.2 材料与试剂
    2.3 仪器与设备
    2.4 溶液配制
    2.5 实验方法
    2.6 结果与分析
        2.6.1 燕麦生物碱B对 β-乳球蛋白的紫外吸收光谱的影响
        2.6.2 燕麦生物碱B对 β-乳球蛋白的荧光光谱的影响
        2.6.3 燕麦生物碱B与 β-乳球蛋白相互作用的荧光猝灭类型
        2.6.4 燕麦生物碱B与 β-乳球蛋白的结合常数与结合位点数
    2.7 讨论
        2.7.1 燕麦生物碱B对 β-乳球蛋白紫外吸收光谱的影响
        2.7.2 燕麦生物碱B对 β-乳球蛋白内源性荧光的影响
    2.8 小结
第3章 燕麦生物碱B与 β-乳球蛋白复合物对大鼠嗜碱性粒细胞RBL-2H3 脱颗粒的影响
    3.1 引言
    3.2 材料与试剂
    3.3 仪器与设备
    3.4 溶液配制
    3.5 实验方法
        3.5.1 RBL-2H3 细胞的复苏
        3.5.2 RBL-2H3 细胞的传代培养
        3.5.3 RBL-2H3 细胞的冻存
        3.5.4 β-乳球蛋白与燕麦生物碱B复合物溶液的制备
        3.5.5 RBL-2H3 细胞毒性实验
        3.5.6 IgE介导的RBL-2H3 细胞体外活化实验
        3.5.7 β-HEX的检测
        3.5.8 组胺含量的检测
        3.5.9 IL-6 含量的检测
        3.5.10 TNF-α含量的检测
        3.5.11 Western Blot 法检测 RBL-2H3 细胞信号通路中 P-Lyn、Lyn、P-JNK、JNK 及 MAPK 家族蛋白的表达情况
        3.5.12 数据分析
    3.6 结果与分析
        3.6.1 燕麦生物碱B、β-乳球蛋白以及复合物对RBL-2H3 细胞毒性的影响
        3.6.2 燕麦生物碱B、β-乳球蛋白以及复合物对RBL-2H3 细胞β-HEX释放的影响
        3.6.3 燕麦生物碱B、β-乳球蛋白以及复合物对RBL-2H3 细胞组胺释放的影响
        3.6.4 燕麦生物碱B、β-乳球蛋白以及复合物对RBL-2H3 细胞IL-6 释放的影响
        3.6.5 燕麦生物碱B、β-乳球蛋白以及复合物对RBL-2H3 细胞TNF-α释放的影响
        3.6.6 酪氨酸激酶Lyn介导的信号通路中关键蛋白的表达检测
    3.7 讨论
        3.7.1 燕麦生物碱B、β-乳球蛋白以及复合物对RBL-2H3 细胞的增殖毒性作用
        3.7.2 燕麦生物碱B、β-乳球蛋白以及复合物影响RBL-2H3 细胞脱颗粒和炎症因子的变化
        3.7.3 燕麦生物碱B、β-乳球蛋白以及复合物影响酪氨酸激酶Lyn介导的信号通路中关键蛋白的表达
    3.8 小结
第4章 燕麦生物碱 B 与 β-乳球蛋白复合物对嗜碱性粒细胞KU812 脱颗粒的影响
    4.1 引言
    4.2 材料与试剂
    4.3 仪器与设备
    4.4 溶液配制
    4.5 实验方法
        4.5.1 牛乳过敏患者血清池的构建
        4.5.2 KU812 细胞的冻存
        4.5.3 KU812 细胞的复苏
        4.5.4 KU812 细胞的传代
        4.5.5 β-乳球蛋白与燕麦生物碱B复合物溶液的制备
        4.5.6 KU812 细胞毒性实验
        4.5.7 IgE介导的KU812 细胞体外活化实验
        4.5.8 β-HEX的检测
        4.5.9 组胺含量的检测
        4.5.10 IL-6 含量的检测
        4.5.11 TNF-α含量的检测
        4.5.12 Western Blot 法检测 KU812 细胞信号通路中 P-Lyn、Lyn、P-JNK、JNK 及 MAPK 家族蛋白的表达情况
        4.5.13 数据分析
    4.6 结果与分析
        4.6.1 β-乳球蛋白、燕麦生物碱B及其复合物对KU812 细胞增殖毒性的影响
        4.6.2 β-乳球蛋白与燕麦生物碱B复合物对KU812 细胞释放β-HEX的影响
        4.6.3 β-乳球蛋白与燕麦生物碱B复合物对KU812 细胞释放组胺的影响
        4.6.4 β-乳球蛋白与燕麦生物碱B复合物对KU812 细胞释放IL-6 的影响
        4.6.5 β-乳球蛋白与燕麦生物碱B复合物对KU812 细胞释放TNF-α的影响
        4.6.6 免疫印迹法检测抗原诱导KU812 细胞活化脱颗粒时Lyn介导的信号通路中关键蛋白的表达
    4.7 讨论
        4.7.1 燕麦生物碱B、β-乳球蛋白以及复合物对KU812 细胞的增殖毒性作用
        4.7.2 燕麦生物碱B、β-乳球蛋白以及复合物影响KU812 细胞脱颗粒和炎症因子的变化
        4.7.3 燕麦生物碱B、β-乳球蛋白以及复合物影响KU812 细胞活化脱颗粒过程中酪氨酸激酶Lyn介导的信号通路中关键蛋白的表达
    4.8 小结
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 创新点
    5.3 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间研究成果



本文编号：3854235