基于磁性微粒纯化法医样本DNA方法的建立

发布时间：2017-11-22 09:08

  本文关键词：基于磁性微粒纯化法医样本DNA方法的建立

  更多相关文章： 二氧化硅磁性微粒 血斑 毛发 DNA 纯化

【摘要】：众所周知,法医样本的DNA纯化是法医DNA分析的关键技术之一。在案件侦破过程中,案发现场常会残留各种微量物证,如微量血痕、精斑、各种衣物纤维上附着的脱落细胞等,这些微量物证的DNA检验对案件的侦破均具有重要的支持作用。但由于此类疑难物证中的DNA含量极少、DNA分子受到外界环境影响易发生损伤或降解、样本本身或在收集过程中常伴有抑制剂残留,这些均给后续的DNA分析造成较大难度。由此可见,高质量DNA纯化技术的应用是成功进行法医疑难物证DNA检测的前提。 目前,犯罪实验室中主流的DNA纯化技术为Chelex-100、硅膜离心柱法,其操作步骤繁琐,纯化效率、产物纯度及完整性相对欠缺,且大多依赖于国外昂贵的试剂盒。因此,本课题以自主研发的“二氧化硅磁性微粒”作为固相载体,以血斑、毛囊为主要实验样本,旨在建立一套高效、廉价且快捷的法医样本DNA纯化方案。此方法利用固相纯化原理,在特定条件下将DNA非特异性地结合于磁性微粒表面,形成“DNA-磁性微粒复合物”,在外加磁场的作用下选择性分离,从而达到纯化的目的。 研究结果表明：1)该方法能够稳定地从血斑样本中纯化得到较高质量的DNA。5mm直径的血斑,DNA纯化产量约65ng,且完整性良好,可直接用于下游PCR反应；批内、批间变异系数分别为7.93%-8.78%、10.1%,与市售同类试剂盒具有可比性；亦可从微量血液、口腔拭子、烟蒂、口香糖等常见法医检材中分离纯化DNA,适应性广泛。2)对上述裂解体系中的盐成份、Ca2+及SDS终浓度做进一步优化,可高效地从毛囊中分离纯化DNA。三根毛发的毛囊,其DNA纯化产量约30-35ng；A260/A280比值在1.7-1.9之间,纯度较高；STRs复合扩增表明DNA分子完整性良好；亦可纯化得到高质量、完整的mtDNA。
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：D919.2

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李万水,陈松,涂政;粪便DNA提取及检验[J];中国法医学杂志;2004年04期

2 贾东涛;韩海军;张玉红;姚建;王林生;;陈旧骨骼DNA提取方法的应用研究[J];中国法医学杂志;2007年04期

3 巴华杰;马骏;刘冰泉;朱爱华;;人类指甲在法医学中的应用[J];中国法医学杂志;2010年03期

4 宣金锋;丁梅;王保捷;庞灏;邢佳鑫;孟菁华;;FTA卡在微量血痕DNA多态性分析中的应用[J];中国法医学杂志;2011年03期

5 徐隆昌;易少华;黄代新;杨庆恩;;DNA甲基化及其与个体年龄相关性研究[J];中国法医学杂志;2011年04期

6 李爱强;赵兴春;张艳霞;赵丽;王华;王项华;宋金平;;生物检材DNA碱性裂解提取法的优化与改良[J];中国法医学杂志;2011年04期

7 关亚卿;李淑瑾;丛斌;马春玲;;DNA甲基化在法医DNA分析中的应用[J];中国法医学杂志;2011年05期

8 叶健,季安全,赵兴春,涂政,张志强,朱世峰,袁丽;烧骨DNA检验技术的研究[J];法医学杂志;2004年03期

9 顾丽华;张晨;陈连康;郑会芬;程莉;周怀谷;;激光显微捕获口腔上皮细胞的DNA分型[J];法医学杂志;2006年03期

10 杨电;刘超;徐曲毅;胡慧英;刘宏;;微量口腔脱落细胞检材的DNA检验[J];法医学杂志;2008年02期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 王会娟;抗肿瘤药物在人肝微粒体中的代谢表型与相关药物代谢酶基因型的关联性研究[D];西北大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 王艳;线粒体DNA序列多态性及其在法医学应用的研究[D];山西医科大学;2002年

2 刘志芳;CYP4502E1基因多态性及法医学和群体遗传学意义的研究[D];中国医科大学;2005年

3 王文辉;精子顶体形态和功能的研究[D];安徽医科大学;2008年

4 殷敏;磁性多壁碳纳米管的功能化修饰及在磁共振成像中的应用[D];上海师范大学;2010年

5 何琼;MtDNA SNPs复合检测体系建立及法医学应用研究[D];南方医科大学;2010年

，

本文编号：1214171