全基因组扩增技术应用于法医学实践的系统研究

发布时间：2020-02-27 03:07

【摘要】：目的:本文拟对简并寡核苷酸引物PCR(DOP)和扩增前引物延伸(PEP)两种全基因组扩增技术在法医学实践中的应用价值进行探讨,对其应用于法医学实践的可行性进行系统评价。方法:对两种全基因组扩增(WGA)技术中可能出现STR滑脱现象的影响因素进行研究,然后在控制这些滑脱影响因素的基础上建立稳定可靠的技术方案;将该技术方案应用于法医学的单基因座扩增聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测系统、多色荧光标记复合扩增毛细管电泳激光自动检测系统以检验两种技术应用于法医学常用STR基因座的可靠性;将该技术应用于法医学常见微量检材单根毛发和指纹的DNA分析,对其法医学应用价值进行评估。结果:初步建立了基于DOP技术的STR滑脱机制模型,对WGA技术中可能导致STR滑脱现象的影响因素得到了解和阐述;在控制WGA技术中可能导致滑脱现象发生的影响因素的基础上,通过优化组合,建立了可靠稳定的PEP和DOP两种WGA技术方案;两种技术方案应用于法医学单基因座STR分析和STR复合扩增分析,均获得了满意的分析结果;建立了通过显微操作捕获细胞进行准
【图文】：

滑脱现象,基因座,DNA模板,模板

第一部分建立STR滑脱模型的初步研究结果3结果3.1全基因组扩增以普通TaqDNA聚合酶催化，产物进行普通PCR扩增，发现当全基因组扩增的初始DNA模板量稀释到一定程度时，在DOP法扩增的样本中出现滑脱现象。当初始DNA浓度大于.025ng时，分型结果准确，在0.125ng时部分基因座分型区出现了新的条带，在稀释到0.025ng则不能检测到。经测序证实，此新出现的条带为新的STR等位基因，即出现了滑脱。此现象在所观察的PEP法中均没观察到。

滑脱,用量,滑脱现象,重复单位

.3滑脱现象发生的规律图1一3.D3s1358基因座扩增结果:滑脱现象发生的规律分别以常规量模板(l一2.ns，g左al~sa)和以初始NDA模板量0.125ng经Dop法扩增的产物为模板(右bl一b5)、协醉1:用量6tll进行同一次扩增。抽为分型ALDDER;NC为阴性对照，，1一5为5个不同样本，相同数字为来自同一个体.由图可见:在纯合子和相差一个及三个以上(含三个)重复单位的杂合子中均未观察到滑脱现象，而在3和4号两个两等位基因相差两个重复单位的杂合子样本中观察到滑脱现象的产生。由此说明:本体系中滑脱只见于两等位基因相差两个重复单位的杂合子。
【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：D919

【引证文献】