生物检材DNA碱性裂解提取法的优化与改良

发布时间：2017-08-10 02:26

  本文关键词：生物检材DNA碱性裂解提取法的优化与改良

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【摘要】：目的通过对DNA碱性裂解提取法进行优化和改进,建立一种操作更简便、检验快速、结果更可靠的生物检材DNA提取方法。方法以抗凝血作为检验样本,通过改变提取试剂的浓度、pH值、保存时间及孵化样本的温度、时间等条件,观测对检验结果峰值的影响,以确定提取试剂最佳条件,DNA提取物最佳保存条件。通过用改良后的碱性裂解法及Chelex100法同时提取不同量的抗凝血样本、各类法医生物检材,用不同厂家的DNA试剂盒扩增,对碱性裂解法的灵敏度、适应性和适用性进行评估。结果改良后的碱性裂解法只需将生物检材用NaOH(0.25mol/L)99℃孵化8min,振荡后加入TrisHCl(0.05mol/L,pH=6.5)中和液,离心后直接扩增检测。DNA提取物于-20℃冰箱可长期保存。对于毛发及精斑类检材优于Chelex100法。DNA提取物适用于现有各种DNA试剂盒扩增检测,其灵敏度与Chelex100法相似。结论改良后的碱性裂解法,操作简便、检验快速、结果可靠,可适合于法庭科学的检案与建库。
【作者单位】： 河北省公安厅;公安部物证鉴定中心;宁夏自治区公安厅;
【关键词】： 法医物证学 碱性裂解法 DNA提取 Chelex
【分类号】：D919
【正文快照】： 1996年Dissing博士首次将广泛应用于细菌提取中国法医学杂志CHIN J FORENSIC MED 2011年第26卷第4期士[2]、刘翠兰[3]及郑秀芬[4]等对上述碱性裂解法进行了改进及补充。但上述报导的方法针对不同类型的法医生物检材,其相对应的提取方法(孵化的温度及时间)各不相同,不能使不同

【参考文献】

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本文编号：648436