关于过敏性休克死者蛋白酶激活受体-2和SC5b-9的实验研究

发布时间：2017-09-21 21:18

  本文关键词：关于过敏性休克死者蛋白酶激活受体-2和SC5b-9的实验研究

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【摘要】：过敏性休克死亡在法医学鉴定中比较常见，近几年来涉及过敏性休克死亡的医疗纠纷逐年攀升。过敏性休克死亡尸检时仅见一般尸体征象，没有特殊的病理形态学改变，因此给法医学鉴定带来很大的障碍。在鉴定中要诊断过敏性休克死亡首先要排除暴力性死亡、疾病、中毒的基础上，，然后结合接触过敏原史、临床表现等，并检测血清中IgE、肥大细胞类胰蛋白酶、胃促胰酶、组胺、P物质等的含量，试图为过敏性休克死亡的法医学鉴定提供详实的诊断标准和形态学依据。本实验在此基础上又进行了，蛋白酶激活受体-2和SC5b-9在过敏性休克死者检材的实验研究。 （1）蛋白酶激活受体（proteinase activated receptors，PARs）是G蛋白偶联受体（GPCRs）家族中的成员。目前在小鼠和人的体内共发现4种PARs,分别为PAR-1、PAR-2、PAR-3、PAR-4，在1991、1994、1997、1998年它们的基因序列被先后克隆出来。研究显示，在过敏反应所涉及的细胞上几乎都有PARs的表达，其中蛋白酶激活受体-2在人体内的表达部位比其他三个受体多，所以我们检测蛋白酶激活受体-2在过敏性休克死亡中的表达情况，为进一步研究过敏性休克死亡提供诊断依据。 实验组：法医病理诊断为过敏性休克死亡46例。对照组：非过敏性休克死亡12例。用免疫组化染色的方法特染蛋白酶激活受体-2。结果在病理诊断为过敏性休克死亡案例中，镜下肾组织内见大量蛋白酶激活受体-2染色阳性细胞，细胞内有大量棕色颗粒，染色阳性的细胞主要位于肾近曲小管和远曲小管的单层立方上皮内。在其他脏器组织内没有见到染色阳性的细胞。非过敏性休克死亡案例中，肺、肾、肠等组织内也没有见到染色阳性的细胞。实验组与对照组比较有显著差异（p0.05）,差异有统计学意义。 （2）SC5b-9存在于血液中，为非溶解性的，是补体系统激活后的最终产物,因此测定其血清含量可以直接反映补体系统激活的情况。补体系统是人体内一种复杂的固有免疫系统，可以通过旁路途径、经典途径和甘露糖结合凝集素途径被激活，产生一系列级联放大效应。无论通过何种途径激活补体系统，当补体系统被活化后，会释放各种生物学活性物质，其中就包括C3a和C5a。C3a和C5a具有过敏毒素的作用，能激活肥大细胞和嗜碱性粒细胞使其脱颗粒，从而释放组胺等介质，产生过敏反应症状。而关于SC5b-9在人体内的表达情况，尚缺乏深入的研究，所以我们检测SC5b-9在过敏性休克死亡中的表达情况，为进一步研究过敏性休克死亡提供诊断依据。 实验组：法医病理诊断为过敏性休克死亡46例，其中血液（由于受溶血等因素的影响）可用于检测的血清样品只有12例。对照组：非过敏性休克死亡12例，血液样品8例。用Western Blot检测血清中SC5b-9的表达水平。结果过敏性休克死亡案例血清样品中SC5b-9的表达水平明显高于非过敏性休克死亡案例血清样品中SC5b-9的表达水平。实验组与对照组比较有显著差异（p0.05），差异有统计学意义。 综上所述： （1）在过敏性休克死亡案例中，蛋白酶激活受体-2在肾脏组织中的表达异常增高，初步认定蛋白酶激活受体-2参与了过敏性休克的发生过程。 （2）在过敏性休克死亡案例中，血清中的SC5b-9的含量明显增高，说明SC5b-9的前身补体被大量激活，初步认定补体参与了过敏性休克发生的某些环节。
【关键词】：过敏性休克死亡 蛋白酶激活受体-2 SC5b-9
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：D919.6
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 引言12-19
• 1.0 文献综述12
• 1.1 与蛋白酶激活受体激活相关的过敏反应12-14
• 1.2 与补体激活相关的过敏反应14-15
• 1.3 血液中的 IGE15-16
• 1.4 血液中的组胺16
• 1.5 肥大细胞16-17
• 1.6 白三烯17-18
• 1.7 嗜酸性粒细胞18-19
• 第2章 蛋白酶激活受体-2 在过敏性休克死者体内的实验研究19-30
• 2.1 立题依据19
• 2.2 实验材料与方法19-21
• 2.2.1 材料19
• 2.2.2 主要试剂19
• 2.2.3 蛋白酶激活受体-2（PAR-2）的免疫组织化学染色 S-P 法19-20
• 2.2.4 结果判定及统计计数方法20
• 2.2.5 常规 HE 染色20-21
• 2.3 实验结果21-22
• 2.3.1 HE 染色21
• 2.3.2 蛋白酶激活受体-2（PAR-2）免疫组化染色21-22
• 附图22-27
• 2.4 讨论27-30
• 第3章 SC5B-9 在过敏性休克死者体内的实验研究30-45
• 3.1 立题依据30
• 3.2 实验材料30
• 3.3 主要试剂和试剂盒30-31
• 3.3.1 试剂30-31
• 3.3.2 试剂盒31
• 3.4 主要试剂配制31-33
• 3.4.1 TBS 缓冲液31
• 3.4.2 TBST 缓冲液31-32
• 3.4.3 封闭液32
• 3.4.4 30%丙烯酰胺储存液32
• 3.4.5 5×SDS-PAGE 电泳缓冲液32
• 3.4.6 5×转膜缓冲液32
• 3.4.7 1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8）32
• 3.4.8 1.0mol/L Tris·HCl（pH6.8）32
• 3.4.9 10％SDS32
• 3.4.10 10％过硫酸胺（AP）32
• 3.4.11 6％的分离胶的配制（15ml）32-33
• 3.4.12 4％的浓缩胶的配制33
• 3.4.13 考马斯亮蓝染色液( 0.25%考马斯亮兰 R250，45%甲醇，10%乙酸)：33
• 3.4.14 脱色液：45%乙醇，7％冰醋酸33
• 3.5 主要仪器33-34
• 3.6 实验方法34-38
• 3.6.1 分离血液34
• 3.6.2 血清蛋白定量34-35
• 3.6.3 蛋白样品的稀释35
• 3.6.4 Western Blot 检测35
• 3.6.5 SDS-PAGE35-36
• 3.6.6 转膜36
• 3.6.7 免疫反应36-37
• 3.6.8 检测37
• 3.6.9 考马斯亮蓝染色37
• 3.6.10 染色37
• 3.6.11 脱色37
• 3.6.12 统计学方法37-38
• 3.7 实验结果38-42
• 3.7.1 血液蛋白定量结果38
• 3.7.2 标准曲线，如图：38
• 3.7.3 计算出 20 个样品的蛋白浓度38-39
• 3.7.4 考马斯亮蓝染色结果39-40
• 3.7.5 Western Blot 结果40-42
• 3.8 讨论42-45
• 第4章 结论45-46
• 参考文献46-49
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果49-50
• 致谢50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 吕凤林,郑萍,黄云辉,胡承香,朱锡华;免疫组化及原位杂交检测人肺组织中的C5a受体[J];第三军医大学学报;2001年10期

2 左芷津;祝家镇;;过敏性休克死亡机体内白三烯变化的研究[J];中国法医学杂志;1992年03期

3 王昌亮;张国华;吴旭;胡薇;唐发兵;王明彪;杨洪波;朱敏;窦国宴;;豚鼠过敏性休克肺组织中类胰蛋白酶和胃促胰酶的表达[J];中国法医学杂志;2010年04期

4 沈忆文,陆超,赵子琴,薛爱民,殷莲华;类胰蛋白酶与过敏性休克死亡的法医学鉴定[J];法医学杂志;2002年03期

5 许以平;世纪之交话过敏性疾病[J];上海免疫学杂志;2000年06期

6 牛青霞,何韶衡;蛋白酶活化受体-2的研究进展[J];生理科学进展;2003年04期

7 陈谱;变态反应性疾病中肥大细胞的特异性激活标志物[J];实用儿科临床杂志;2004年02期

8 朱薇,何韶衡,林梓霞,傅意玲;人嗜碱性粒细胞在不同刺激物作用下的组胺释放能力[J];细胞与分子免疫学杂志;2005年04期

9 刘玉春;急性药物过敏性间质肾炎[J];临床医学杂志;1987年05期

本文编号：896926