硅藻18S rRNA鉴别实验家兔水中尸体死因的研究

发布时间：2017-10-05 21:22

  本文关键词：硅藻18S rRNA鉴别实验家兔水中尸体死因的研究

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【摘要】：目的：利用硅藻18S rRNA基因检测判定实验家兔水中尸体的死亡原因。方法：将实验家兔随机分成溺死组、死后抛尸入水组及空白对照组；溺死组和死后抛尸入水组又分为两个亚组：长江水域组和护校河水域组。各组按实验设计分别提取死后家兔的肺、肝、肾、脑组织和心血，匀浆后，，选用硅胶密度梯度离心法分离组织中的硅藻并采用Chelex-100法提取硅藻DNA，运用PCR技术扩增硅藻特异的18S rRNA基因片段，并使用琼脂糖凝胶电泳法、变性梯度凝胶电泳法、以及DNA测序技术三种方法对扩增结果进行检测并加以分析。同时使用传统的强酸消化法检测肺、肝和肾组织中的硅藻，并与PCR结果进行对比。结果：溺死组肺、肝、肾、脑组织及心血中硅藻检测多数呈阳性：肺（100%）、肝（75%）、肾（83%）、脑（75%）、心血（58.3%）；死后抛尸入水组仅在肺组织和肾组织中各检出2例和1例阳性；空白对照组各组织全部呈阴性。强酸消化法在溺死组肺、肝和肾组织中的硅藻检出率分别为：肺（83%）、肝（25%）和肾（16.7%），而死后抛尸入水组仅在1例肺组织中检出硅藻。 结论：将PCR技术扩增硅藻18S rRNA基因片段运用到家兔水中尸体的死亡原因判断，其灵敏度和特异性均优于传统的硅藻强酸消化法。此检测方法对水中尸体的死因鉴定具有一定的应用前景。
【关键词】：硅藻18S rRNA PCR扩增 DGGE DNA测序 水中死亡 死因鉴定
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：D919.4
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-8
• 摘要8-9
• Abstract9-11
• 前言11-20
• 1. 硅藻的生物学特性及其分布12-13
• 2. 硅藻的法医学检验方法13-17
• 2.1 化学消化法13
• 2.2 酶消化法13-14
• 2.3 微波消解法14
• 2.4 高温灰化法14
• 2.5 浸渍法14-15
• 2.6 硅胶梯度离心法15
• 2.7 水中浮游生物叶绿素检测15
• 2.8 分子生物学检验15-16
• 2.9 各方法的硅藻检出率比较16-17
• 3. 硅藻 18S rRNA 基因序列的特异性17-18
• 4. 研究总体思路18-20
• 研究内容与方法20-27
• 1. 研究内容20
• 2. 材料与方法20-27
• 2.1 动物模型制作材料20
• 2.2 实验试剂20
• 2.3 实验仪器20-21
• 2.4 实验方法21
• 2.5 检材制备与 DNA 扩增21-23
• 2.6 DNA 测序分析23-24
• 2.7 电泳分析24-26
• 2.8 强酸消化法26-27
• 结果27-31
• 1. 硅藻 18S rRNA 检测结果27-28
• 2. DGGE 检测结果28
• 3. DNA 测序结果28
• 4. 强酸消化法硅藻检测结果28-31
• 讨论31-37
• 1. 硅藻 18S rRNA PCR 检测在溺死鉴定中的应用价值31-32
• 2. DGGE 技术对于硅藻检测的应用价值32-34
• 3. DNA 测序技术结果分析34-35
• 4. 组织中硅藻 DNA 的分离35-36
• 5. 强酸消化法在硅藻检测中的应用价值36-37
• 结论37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-43
• 附录43-44
• 综述44-52
• 参考文献50-52
• 作者简介及读研期间主要科研成果52

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1 周玉倩;硅藻18S rRNA鉴别实验家兔水中尸体死因的研究[D];皖南医学院;2013年

本文编号：978886