室内燃煤细颗粒物对卵蛋白诱导哮喘大鼠气道炎症的作用

发布时间：2018-11-27 17:55

【摘要】：目的:通过观察室内燃煤细颗粒物(Particulate matter 2.5,PM2.5)对致敏源(Ovalbumin,OVA)诱导哮喘大鼠作用,探讨室内燃煤PM2.5对OVA诱导哮喘大鼠的气道炎性损伤及病理改变。方法:1.以遵义块煤为样,采用滤膜收集室内燃煤PM2.5,将采样后的滤膜置于TFM消解罐中,加入40 ml浓硝酸/浓盐酸(V/V=1:3)进行微波消解。石墨炉原子吸收仪检测其铅(Plumbum,Pb)、镉(Cadmium,Cd)等元素。2.将携带有室内燃煤PM2.5的滤膜进行超声水洗,12层纱布过滤后真空冷冻干燥。用生理盐水(Normal saline,NS)配置浓度为15μg/ml OVA和(或)2.5 mg/ml的PM2.5混悬液。将40只6周龄雄性SD大鼠随机分为Control、OVA、PM2.5、PM2.5+OVA四组,通过气管滴注分别予以NS、OVA(15μg/ml)和(或)PM2.5(2.5 mg/ml)混悬液200μl,2周/次,共4次。末次滴注24小时后采集支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,Balf)检测炎性细胞分布,酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,Elisa)检测白介素4(Interleukin 4,IL-4)、γ干扰素(Interferonγ,IFN-γ)、转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)、IL-8、集落刺激因子(granulocyte macraoprage colony stimulating factor,GM-CSF)。右上肺做HE染色及电镜切片。Elisa血清检测特异性免疫球蛋白Ig E(Immunoglobulins E,OVA-Ig E)、OVA-Ig G1。Real-time Polymerrase chain reaction(RT-PCR)检测肺组织Il-4、Ifn-γ基因的表达。结果:1.室内燃煤PM2.5环境日均浓度为156.95μg/m3,超过国家环境空气质量标准规定的75μg/m3的浓度标准(P=0.004);元素锌(Zinc,Zn)含量最高,为34.81μg/m3,最低的是锰(Manganese,Mn)元素0.019μg/m3。2.行为观察PM2.5+OVA组大鼠烦躁不安,抓耳捞腮频率高,呼吸频率加深加快,肺部可闻及异常呼吸音。肉眼观察肺组织Control组色泽、形态正常;OVA组色泽灰暗,表面粗糙,偶见水肿;PM2.5组肺色泽较灰暗,表面粗糙,偶见水肿,PM2.5+OVA组肺色泽异常,表面粗糙,可见大片白色或半透明病灶,疏松柔软有弹性,明显水肿,边沿缺口状凹陷明显。Balf炎性细胞分布PM2.5+OVA组炎性细胞较Control组增多(P0.05),主要以淋巴细胞(Lymphocyte,Lym)及单核细胞(Monocyte,Mon)为主。肺支气管苏木素-伊红(Hematoxylin and eosin,HE)染色镜下见Control组炎性细胞较少,PM2.5组及OVA组炎性细胞中等量浸润,PM2.5+OVA组大量炎性细胞浸润。淋巴细胞Control组较OVA组、PM2.5组、PM2.5+OVA组比较浸润增加;杯状细胞PM2.5+OVA组、OVA组较Control组增多(P0.05)。电镜下Control组支气管超微结构未见明显损伤;OVA组可见有大量即将脱落细胞,局部可见II型细胞破损;PM2.5组可见内皮细胞广泛水肿,肺泡间隔可见大量纤维;PM2.5+OVA组可见炎性细胞浸润,细胞器大量破坏,基底膜厚度不均,气血屏障结构不清晰。Elisa及RT-PCR检测表明PM2.5+OVA组IL-4较PM2.5组、OVA组及Control组表达增加(P0.05),IFN-γPM2.5+OVA组、PM2.5组、OVA组较Control组降低(P0.05);GM-CSF PM2.5+OVA组较PM2.5组、OVA组、Control组表达增多(P0.01),PM2.5组、OVA组较Control组表达增多(P0.05);IL-8 PM2.5+OVA组较OVA组、Control组表达增多(P0.05),PM2.5组较空白增加(P0.05),余组间无差异;TGF-β1PM2.5+OVA组、PM2.5组及OVA组与Control组比较降低(P=0.0001),PM2.5+OVA组与OVA组相比表达降低(P0.05),余组间无差异。血清中OVA-Ig E PM2.5+OVA组与余3组相比升高(P=0.0001),OVA组与空白、PM2.5组相比表达增多(P=0.0001),空白组与PM2.5组未见差异;OVA-Ig G1组间未见差异。结论:室内燃煤PM2.5在OVA诱导哮喘大鼠肺组织结构改变、细胞因子表达异常、炎性细胞浸润增加中起促进作用,进而加重OVA诱导哮喘大鼠呼吸道炎性损伤及组织结构改变。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R12

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本文编号：2361603