基于PLGA的细胞内传感器用于监测持久性有机污染物细胞毒性的方法研究

发布时间：2020-04-09 04:50

【摘要】：持久性有机污染物(POPs)是一类有机化合物,包括农药、二恶英、呋喃、多氯联苯和全氟类化合物等。POPs持久存在于环境中,具有长的半衰期、长残留性、生物蓄积性、半挥发性和高毒性等特点。近年来,众多研究表明POPs的高剂量短期暴露会导致生殖系统损伤、免疫系统损害、内分泌紊乱、神经毒性和癌症等重大疾病。由于POPs在自然环境中难以降解,并且随着POPs的逐渐禁用,人类长期暴露于低剂量的POPs环境中。当前毒理学研究中采用的POPs浓度高于人类血液样本中POPs的检出浓度,因此持久性有机污染物的低剂量长期暴露的细胞毒性一直是全球关注的重要科学问题。当前的细胞毒性分析方法存在两个弊端,一是传统终点式分析方法缺少对于细胞响应的实时监测,无法在较低的时间分辨率内观测细胞响应的细微变化;二是所用癌化细胞系无法真实反映人原代细胞的响应。针对上述问题,本论文设计可集成到细胞内的传感器,用于实时监测细胞在有毒污染物刺激下特定生物分子的响应变化。同时采用人体骨髓间充质干细胞作为研究对象,研究其与典型POPs低剂量长期共培养下特定生化指标(细胞存活、活性氧的产生以及脂肪分化相关基因变化)与功能的响应。主要工作如下:1.利用双乳液合成法合成了基于可生物降解的聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体的传感器,同时调控制备条件并用聚赖氨酸(PLL)进行表面正电荷修饰,成功将传感器尺寸控制在1μm左右,实现了对人源间充质干细胞的标记以及长达30天的细胞功能实时监测。2.采用以上合成方法成功合成了PLGA@calceinAM和PLGA@CellROX两种传感器,并成功实现了对细胞内溶质酯酶(指示细胞活性)和活性氧的灵敏检测。进一步对0.1和10μM两个剂量(普通人群与职业人群的血液浓度)全氟辛烷磺酸长期暴露下的hMSCs细胞内溶质酯酶及细胞内活性氧变化进行了短期(0-48小时)和长期(0-14天)的监测。3.成功设计了激动蛋白(β-actin)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)和脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(ap2)分子信标,并验证了三种分子信标对各自靶标链浓度的特异性响应。制备了基于PLGA的分子信标传感器,用以同时监测细胞内β-actin、PPARγ和ap2的mRNA表达水平。在0.1和10μM两个剂量全氟辛烷磺酸长期暴露下对hMSCs的脂肪分化进行监测,选取细胞中稳定表达的β-actin作为内参,监测两种与细胞脂肪分化相关的基因PPARγ和ap2的表达。本论文以PLGA传感器集成的人源间质充干细胞为研究平台,为研究POPs低剂量长期暴露下细胞毒性提出了新思路。
【图文】：

南京邮电大学硕士研究生学位论文 第一章 绪论其他暴露途径包括吸入、通过母亲在子宫内暴露，以及较小程度的母乳喂养等。接触持久性有机污染物会损害神经、激素、生殖和免疫系统，同时高暴露甚至导致死亡。急性暴露于持久性有机污染物往往与出生缺陷和癌症有关，而慢性低剂量暴露则经常与代谢和心血管疾病有关。表 1.1 《斯德哥尔摩公约》中公布的持久性有机污染物类型[1]

学硕士研究生学位论文 第肉制品、鱼类和引用水中都监测到 PFOS。食品中 PFOS 的占比为鱼、贝制品>饮料>蔬菜，且不同类型的水受 PFOS 的影响程度为井水>自来水>[6]。对于 PFOS 的地域分布调查显示，在亚太地区、北美洲、欧洲和南极清和血浆中都有检测到 PFOS，即使是南极洲的极地贼鸥血清中的浓度也ng/mL[5]。世界各地人类血浆中 PFOS 浓度的调查表如表 1.2 所示，均处于献 报 道 的 毒 理 学 研 究 工 作 中 选 用 的 PFOS 浓 度 明 显 高 于 人 类 ，，研究时间通常为≤96 小时。考虑到人类血清中 PFOS 清除的算术平均半此对于低剂量长期暴露的 PFOS 的毒性监测对当前毒理学研究具有重要意
【学位授予单位】：南京邮电大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：X85;X171.5;TP212

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本文编号：2620312