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海水中胃肠道感染病毒的病原性检测及风险评价

发布时间:2024-06-29 03:24
  胃肠道感染病毒是除细菌之外的引起胃肠道疾病的主要病原体之一,通过接触娱乐用水或食用被污染的贝类感染人体。这类病毒主要来源于人畜粪便等排泄物污染的生活污水,在各种水环境中普遍存在,并且存活时间长,感染剂量低,可以通过娱乐用水或食用海产品感染人类。因此,建立其快速、高效的检测技术,对于水传播疾病的预防和控制是迫切需要的。然而目前尚没有一种同时确定其感染性和快速定量的方法,给人体健康风险评估带来了很大的障碍。因此,本论文从这一点出发,开展了以下相关的工作。 选取具有指示作用的胃肠道感染病毒—肠道病毒(EV)和感染性最强的胃肠道感染病毒—轮状病毒(RV)为指示微生物,实现以下目标:1.建立快速定量水环境中具有感染性病毒浓度的方法,同时探讨不可培养病毒的病原性检测方法;2.将此方法在渤海湾天津海域进行了应用与可行性分析;3.通过探讨病毒在海洋环境中的存活时间和灭活机理,对病毒感染人体的健康风险进行了实际评估。 主要研究内容和研究成果如下: 1.分别建立了肠道病毒代表种脊髓灰质炎病毒(PV)和RV的细胞培养结合实时定量PCR(ICC-qPCR)检测方法,克服了细胞培养和实时定量PCR技术单独作用时...

【文章页数】:154 页

【学位级别】:博士

【部分图文】:

图2.1Vero细胞形态(×100),(a):正常Vero细胞;(b):病变Vero细胞

图2.1Vero细胞形态(×100),(a):正常Vero细胞;(b):病变Vero细胞

图2.1Vero细胞形态(×100),(a):正常Vero细胞;(b):病变Vero细胞2.2.4.2空斑法测定病毒滴度致细胞病变的病毒,能够在固态琼脂培养基覆盖下的细胞单层中形成肉可见的空斑,通过计数形成空斑的数量可准确地测定病毒滴度[96]。操作过程为1)接....


图2.2PV1在Vero细胞上形成的空斑(稀释106倍)

图2.2PV1在Vero细胞上形成的空斑(稀释106倍)

.2PV1在Vero细胞上形成的空斑(稀释10real-timePCR方法的建立erPrimier5.0,根据脊髓灰质炎度保守区5′UTR设计引物(PqF/PqRst功能检测引物和探针的特异性;R设计实时定量PCR(real-timePCR)....


图2.3脊髓灰质炎病毒电泳图,其中(a)为构建质粒的扩增片段(M:DL2000Marker;

图2.3脊髓灰质炎病毒电泳图,其中(a)为构建质粒的扩增片段(M:DL2000Marker;

扩增产物经电泳检测,结果如图2.3(d)所示。(a)(b)(c)(d)图2.3脊髓灰质炎病毒电泳图,其中(a)为构建质粒的扩增片段(M:DL2000Marker;1:阴性对照;2:目的片段);(b)连接后载体引物扩增片段(M:Marker;1-5泳道为连接片段);(c....


图2.4肠道病毒实时定量PCR标准曲线(a)和扩增曲线(b)

图2.4肠道病毒实时定量PCR标准曲线(a)和扩增曲线(b)

斜率为-3.407(有效范围-3.5≤斜率≤-3.0),E=95.5﹪,各项参数指标良好,并且稳定性高,阴性对照无产物扩增,可以作为后续的标准曲线(图2.4(a))。(1)灵敏度测试将标准品按10倍梯度稀释,至终浓度为1.0×100~1.0×109拷贝数/μL,分别取1μL为模....



本文编号:3997093

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